人IL-3基因cDNA的克隆及其在造血干细胞的表达

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目的克隆人IL-3基因cDNA并转导人脐带血造血干细胞,然后研究这一细胞因子的表达情况,从而为脐血扩增及移植打下理论基础。方法从人外周血单个核细胞中提取IL-3mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增IL-3cDNA,通过T/A克隆法,构建真核表达型载体pcDNA3/IL-3。将pcDNA3/IL-3质粒转导脐血造血干细胞,并于1~7 d检测IL-3表达情况。结果pcDNA3/IL-3重组质粒的目的基因与IL-3基因序列相同;pcDNA3/IL-3转导脐血造血干细胞后,经检测能够有效表达。结论成功克隆了hIL-3并构建重组质粒pcDNA3/IL-3,该质粒转导脐血造血干细胞后,能在短期内有效表达。
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