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根据多条单核细胞增多性李斯特菌的hly基因序列，设计了1对简并引物和1条TaqMan探针，建立荧光定量PCR快速检测单核细胞增多性李斯特菌的方法，对该方法的特异性、灵敏度进行了验证，并采用该法对染菌的鲜切甜瓜进行了检测。结果表明，该方法具有较好的特异性，对质粒标准品的灵敏度为1．12×10^2copies／μL，对染菌的鲜切甜瓜中单核细胞增多性李斯特菌的最低检出限为6．28×10^2cfu／mL。该方法可为快速检测鲜切果蔬病原微生物污染度及其控制奠定技术基础。