【摘 要】
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为探索vp2特异miRNA在鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)复制中的作用,采用RT-PCR法扩增IBDV结构蛋白基因vp2,构建pVP2-GFP;据序列测定结果用Genscript软件设计5条vp2特异miRNA,分
【机 构】
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江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室; 昆山出入境检验检疫局;
【基金项目】
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2012年江苏畜牧兽医职业技术学院重点支持项目(ZD1204)
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为探索vp2特异miRNA在鸡传染性法氏囊炎病毒(IBDV)复制中的作用,采用RT-PCR法扩增IBDV结构蛋白基因vp2,构建pVP2-GFP;据序列测定结果用Genscript软件设计5条vp2特异miRNA,分别插入pRFPRNAiC中构建miVP2表达载体;将这些载体与pVP2-GFP共转染鸡胚成纤维细胞,通过荧光共聚焦显微镜定性、流式细胞术定量的方法进行有效miRNA的筛选;有效miVP2转染DF-1细胞,之后感染IBDV,半定量RT-PCR法检测特异性miVP2的表达,TCID50测定miRNA对IBDV的抑制效率。结果显示,成功表达的miVP2对VP2的抑制效率为59.7%~78.5%;miVP2A和miVP2E对病毒的抑制效率为76%~82%,抑制时间至少达120h。表明,筛选获得了能抑制IBDV复制的miVP2A和miVP2E。
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