【摘 要】
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目的在大肠杆菌中对人的era基因(简称hera)进行表达、纯化. 方法 PCR扩增hera基因,测序正确后克隆入大肠杆菌融合表达载体pRSET-C,重组质粒pRSETC- he ra以大肠杆菌BL21(DE3)
【机 构】
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第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金，军队医药卫生科研项目
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目的在大肠杆菌中对人的era基因(简称hera)进行表达、纯化. 方法 PCR扩增hera基因,测序正确后克隆入大肠杆菌融合表达载体pRSET-C,重组质粒pRSETC- he ra以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主菌,用IPTG进行诱导表达. 然后利用亲和层析的方法对表达蛋白进行纯化. 结果克隆了hera基因, 测序正确;利用pRSET-C载体在大肠杆菌中融合表达了全长hera-cDNA基因,表达量占细菌总蛋白的59.6%. 融合蛋白在菌体内主要以包涵体形式存在,在变性条件下用Ni-NTA亲和色谱柱纯化
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