【摘 要】
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目的研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制。方法先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10
【机 构】
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西南医科大学附属医院肾病内科; 西南医科大学中西医结合防治器官纤维化实验室; 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室; 广西中医药大学第一附属医院肾病内科国家中药管理局重
【基金项目】
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国家自然科学基金(81560761);中国博士后科学基金(2017M612987);西南医科大学附属医院-学校联合青年基金([2016]4号)
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目的研究紫花前胡素抑制顺铂诱导的NRK-52E正常大鼠肾小管上皮细胞凋亡的作用机制。方法先采用CCK-8法检测(0、10、20、40、80、100、150、200)μmol/L紫花前胡素、(0、5、10、20、30、40、50)μg/mL顺铂处理24 h对细胞增殖的影响,确定最佳处理剂量;而后采用20μg/mL顺铂联合(10、50、100)μmol/L紫花前胡素刺激NRK-52E细胞,CCK-8法检测对细胞活力的影响。细胞分为正常对照组、20μg/mL顺铂刺激组、(10、50、100)μmol/L紫花前胡素处理组。倒置相差显微镜观察细胞形态改变,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变,流式细胞术检测细胞凋亡水平,二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot法检测细胞凋亡标志蛋白裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、裂解型多腺苷二磷酸核糖聚合酶(c-PARP)的蛋白水平。结果与正常对照组相比,顺铂能显著抑制细胞活性,其半数抑制浓度(IC50)约为20μg/mL;与模型组比较,紫花前胡素预处理后,细胞内ROS水平显著降低,c-caspase-3、c-PARP蛋白水平降低,细胞凋亡减少。结论紫花前胡素能降低NRK-52E细胞ROS水平并抑制顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡。
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