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通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对，设计带有酶切位点的引物35S和Tnos，通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段，通过定向的酶切、连接获得5X价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程，具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点，而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的，为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。