【摘 要】
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目的 观察透明质酸(HA)复合腺病毒介导的人骨形态发生蛋白(Adv-hBMP)-2基因转染的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的体内外诱导成骨活性.方法 (1)体外成骨活性研究方法:分成4组,Adv-hBMP-2转染细胞+HA组、Adv-hBMP-2转染细胞组、未转染细胞+HA组和未转染细胞组,采用免疫沉淀法(IP)、Westem印迹法检测hBMP-2表达、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测骨
【机 构】
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200011,上海第二医科大学附属第九人民医院骨科,200011,上海第二医科大学附属第九人民医院骨科,200011,上海第二医科大学附属第九人民医院骨科,200011,上海第二医科大学附属第九人民医
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目的 观察透明质酸(HA)复合腺病毒介导的人骨形态发生蛋白(Adv-hBMP)-2基因转染的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的体内外诱导成骨活性.方法 (1)体外成骨活性研究方法:分成4组,Adv-hBMP-2转染细胞+HA组、Adv-hBMP-2转染细胞组、未转染细胞+HA组和未转染细胞组,采用免疫沉淀法(IP)、Westem印迹法检测hBMP-2表达、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测骨涎蛋白mRNA表达、ALP和von Kossa染色及ALP定量检测;(2)裸鼠肌内诱导成骨实验:裸鼠12只(共24侧)分4组:注射Adv-hBMP-2转染细胞+HA组(n=8)、注射Adv-hBMP-2转染细胞组(n=8)、注射未转染细胞组(n=4)和单纯注射HA组(n=4),观察方法采用X线、成骨计量对照、组织学观察法.结果 (1)Adv-hBMP-2转染细胞+HA组和Adv-hBMP-2转染细胞组BMSCs表达hBMP-2和骨涎蛋白mRNA,两组的ALP活性均高于未转染细胞+HA组和未转染细胞组(P<0.01),并有明显的钙结节形成;(2)Adv-hBMP-2转染细胞+HA组和Adv-hBMP-2转染细胞组均有成骨,两组差异有显著性(P<0.01),未转染细胞和单纯注射HA组均未见成骨,局部以纤维和脂肪组织为主.结论HA复合Adv-hBMP-2基因转染的BMSCs在体外有较好的诱导成骨活性,在裸鼠肌内有良好的诱导成骨和成软骨的作用,是可注射性的骨缺损修复方法。
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