组织工程角膜内皮的体外构建及在猕猴角膜移植中的应用

来源 :中华眼视光学与视觉科学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shengyue1212
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目的

体外构建出形态结构功能正常的组织工程人角膜内皮(TE-HCE),并以猕猴动物模型验证其维持角膜透明的作用。

方法

实验研究。以非转染人角膜内皮单克隆细胞株细胞(mcHCE细胞)为种子细胞,以去上皮层修饰羊膜(mdAM)为载体支架体外构建出TE-HCE,对其透明度、形态、细胞密度、组织学结构、超微结构、功能蛋白的荧光表达进行检测;采用穿透性角膜移植手术(PKP)对猕猴右眼分别移植TE-HCE (3眼,TE-HCE组)和mdAM (3眼,mdAM组),未移植的左眼作为正常对照眼(6眼,对照组),利用裂隙灯显微镜、角膜内皮镜、角膜测厚仪和眼压计对术后动物的角膜透明度、角膜内皮细胞密度(ECD)、中央角膜厚度(CCT)和眼压(IOP)进行在体检测,并利用荧光显微镜检测移植眼角膜内皮细胞的CM-DiI标记。数据处理均采用单因素方差分析。

结果

体外构建的TE-HCE透明度高,具有与活体角膜内皮近似的形态结构,单层细胞密度高达(3 602±45)个/mm2,细胞连接蛋白和膜运输蛋白呈阳性表达;术后跟踪观测结果显示,TE-HCE移植眼的角膜没有出现明显的炎症和免疫排斥反应,角膜维持透明,虽然出现了轻度角膜水肿,但随着时间的推移CCT逐渐下降,术后181 d时单层细胞密度为(2 796±157)个/mm2;而mdAM移植眼的角膜则出现了明显的炎症反应,长入了新生血管,角膜持续混浊与水肿,厚度没有明显的下降趋势;各组间IOP的变化无明显差异。CM-DiI荧光检测结果显示TE-HCE移植眼的角膜内皮移植区的细胞均带有CM-DiI标记(来自于移植的TE-HCE)。

结论

体外构建的高密度TE-HCE具有正常的形态结构,且功能蛋白表达正常,移植后能使猕猴角膜逐渐恢复透明度和厚度,表明TE-HCE在体内可重建出功能正常的角膜内皮,有望用于角膜内皮异常疾病的临床治疗。

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