【摘 要】
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目的 研究内皮细胞接触烟曲霉后表面受体树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(Dectin-1)及Toll样受体2(TLR2)的表达变化,探讨其在免疫过程中的作用.方法 烟曲霉与人脐静脉内皮细
【机 构】
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南京大学/南京军区南京总医院呼吸内科
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目的 研究内皮细胞接触烟曲霉后表面受体树突状细胞相关性C型植物血凝素-1(Dectin-1)及Toll样受体2(TLR2)的表达变化,探讨其在免疫过程中的作用.方法 烟曲霉与人脐静脉内皮细胞共孵育,分不同时间(1、2、4及6 h)点收集细胞,流式细胞仪检测Dectin-1受体及TLR2表达的变化;提取细胞总蛋白,应用Western blot法检测细胞受体蛋白表达水平的变化;应用间接免疫荧光染色法观察各受体在细胞内外的分布情况.结果 (1)静息状态下,内皮细胞膜表面可见Dectin-1及TLR2表达,其平均荧光强度值分别为45和13.经烟曲霉刺激后,TLR2表达逐渐下降至18,Dectin-1表达先升高后下降,接触2 h后平均荧光强度值升至35,6 h后又降至18;(2)Western blot 法检测结果显示,内皮细胞经烟曲霉刺激后2 h Dectin-1蛋白表达最明显,4 h次之,6 h最低;而TLR2在各时间点均无明显变化;(3)共聚焦显微镜下可见部分烟曲霉出芽孢子和菌丝进入内皮细胞,细胞膜、孢子和菌丝表面均可见 Dectin-1表达;TLR2仅在细胞表面表达.结论 烟曲霉感染时,内皮细胞可表达Dectin-1及TLR2,这对识别是否为烟曲霉感染有重要价值.
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