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目的：观察不同浓度辛伐他汀(Simvastatin,SIM)对高糖诱导的血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)增殖以及分泌一氧化氮(nitric oxide,No)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的影响；了解不同浓度SIM对高糖诱导VEC中涪陛氧(reactive oxygen species,ROS)含量、细胞凋亡率以及c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N terminal kinase,JNK)磷酸化水平的影响,初步探讨SIM保护VEC的作用机制。
方法：体外完全DMEM培养基培养VEC,将处于对数生长期的VEC随机分为5组,A组：正常对照组(G1u 5.5mmol/L)；B组：高糖组(Glu 33mmol/L)；C组：高糖+低浓度SIM组(1×10-7mmol/L)；D组：高糖+中浓度SIM组(1×10-6mmol/L)；E组：高糖+高浓度SIM组(1×10-5mmol/L).①四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度SIM及不同作用时间点6h,12h,18h,24h时VEC增殖的变化,以确定SIM最佳保护时间.②分别用硝酸还原酶法和放射免疫法检测各组细胞上清液中NO和ET-1的水平；③用双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(2,7-dichlorodmy-drofluorescein diacetatc,DCFH-DA)检测各组细胞ROS的水平；④用Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡率；⑤增加F组即高糖+SP600125组(SP600125 10.0μmol/L),Western-Blot检测各组细胞JNK、p-JNK蛋白表达。
结果：①与B组相比,SIM可显著改善高糖对VEC增殖的抑制(P<0.01),且呈浓度依赖性；SIM在作用18h时对VEC增殖的改善最为显著(P<0.01).②与A组相比,高糖组VEC上清中NO水平明显下降,ET-1水平明显上升(P<0.01)；与B组相比,SIM能明显升高NO水平,明显降低上清中ET-1水平,且呈浓度依赖性(P<0,05).③与A组相比,高糖组VEC的ROS含量明显升高(P<0-01)；与B组相比,SIM组ROS含量呈浓度依赖性下降(P<0.05).④与A组相比,高糖组VEC的凋亡率明显增加(P<0.01),与B组相比,SIM组细胞凋亡率呈浓度依赖性下降,其中中、高浓度SIM组细胞凋亡率明显下降(P<0.05).⑤与A组相比,高糖组细胞JNK磷酸化水平明显上升(P<0.01)；与B组相比,SIM能显著降低高糖组JNK的磷酸化水平,且呈浓度依赖性(P<0.05)；与B组相比,SP600125预处理的高糖组JNK磷酸化水平明显下降(P<0.05)。
结论：高糖明显抑制VEC的增殖,减少NO分泌,增加ET-1分泌和细胞内ROS的生成,促进细胞凋亡,增加JNK的磷酸化水平；SIM可明显改善上述各指标,且有一定的浓度依赖性；JNK抑制剂SP600125预处理后,VEC的p-JNK表达显著减少；SIM可能是通过抑制JNK的磷酸化水平,阻断JNK通路的激活,从而达到保护血管内皮细胞的作用。
方法：体外完全DMEM培养基培养VEC,将处于对数生长期的VEC随机分为5组,A组：正常对照组(G1u 5.5mmol/L)；B组：高糖组(Glu 33mmol/L)；C组：高糖+低浓度SIM组(1×10-7mmol/L)；D组：高糖+中浓度SIM组(1×10-6mmol/L)；E组：高糖+高浓度SIM组(1×10-5mmol/L).①四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度SIM及不同作用时间点6h,12h,18h,24h时VEC增殖的变化,以确定SIM最佳保护时间.②分别用硝酸还原酶法和放射免疫法检测各组细胞上清液中NO和ET-1的水平；③用双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(2,7-dichlorodmy-drofluorescein diacetatc,DCFH-DA)检测各组细胞ROS的水平；④用Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡率；⑤增加F组即高糖+SP600125组(SP600125 10.0μmol/L),Western-Blot检测各组细胞JNK、p-JNK蛋白表达。
结果：①与B组相比,SIM可显著改善高糖对VEC增殖的抑制(P<0.01),且呈浓度依赖性；SIM在作用18h时对VEC增殖的改善最为显著(P<0.01).②与A组相比,高糖组VEC上清中NO水平明显下降,ET-1水平明显上升(P<0.01)；与B组相比,SIM能明显升高NO水平,明显降低上清中ET-1水平,且呈浓度依赖性(P<0,05).③与A组相比,高糖组VEC的ROS含量明显升高(P<0-01)；与B组相比,SIM组ROS含量呈浓度依赖性下降(P<0.05).④与A组相比,高糖组VEC的凋亡率明显增加(P<0.01),与B组相比,SIM组细胞凋亡率呈浓度依赖性下降,其中中、高浓度SIM组细胞凋亡率明显下降(P<0.05).⑤与A组相比,高糖组细胞JNK磷酸化水平明显上升(P<0.01)；与B组相比,SIM能显著降低高糖组JNK的磷酸化水平,且呈浓度依赖性(P<0.05)；与B组相比,SP600125预处理的高糖组JNK磷酸化水平明显下降(P<0.05)。
结论：高糖明显抑制VEC的增殖,减少NO分泌,增加ET-1分泌和细胞内ROS的生成,促进细胞凋亡,增加JNK的磷酸化水平；SIM可明显改善上述各指标,且有一定的浓度依赖性；JNK抑制剂SP600125预处理后,VEC的p-JNK表达显著减少；SIM可能是通过抑制JNK的磷酸化水平,阻断JNK通路的激活,从而达到保护血管内皮细胞的作用。