【摘 要】
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[目的]以人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为糖尿病肾病（DKD）体外模型,通过研究高糖刺激下hsa-miR-223-3p在内皮细胞中的变化,明确hsa-miR-223-3p与预测靶基因IL6ST、PRKCE间的关系,探究hsa-miR-223-3p与预测靶基因下游通路的变化与高糖刺激间的关系,从而间接探究DKD发病机制中hsa-miR-223-3p变化与内皮损伤间的关联机制。[方法]实验分为四步（
【基金项目】
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2019年国家自然科学地区科学基金（81960156）； 云南省应用基础研究昆医联合专项（2019FE001-040）；
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[目的]以人脐静脉内皮细胞（HUVECs）为糖尿病肾病（DKD）体外模型,通过研究高糖刺激下hsa-miR-223-3p在内皮细胞中的变化,明确hsa-miR-223-3p与预测靶基因IL6ST、PRKCE间的关系,探究hsa-miR-223-3p与预测靶基因下游通路的变化与高糖刺激间的关系,从而间接探究DKD发病机制中hsa-miR-223-3p变化与内皮损伤间的关联机制。[方法]实验分为四步（1）运用人肾小球内皮细胞（HRGECs）验证高糖刺激下,hsa-miR-223-3p与预测靶基因IL6ST、PRKCE的变化情况。（2）用双荧光素酶报告基因实验,证明hsa-miR-223-3p与预测靶点的关系。（3）用高糖刺激研究内皮功能的经典细胞模型HUVECs,探究内皮细胞形态、增殖迁移速率的变化;用qRT-PCR方法检测高糖刺激下hsa-miR-223-3p和靶基因mRNA的变化,并用内皮因子VEGF、ET1和纤维化指标αSMA、FN1的变化评估高糖刺激对内皮细胞的影响。（4）在 HUVECs 中转染 hsa-miR-223-3p-mimic 使 hsa-miR-223-3p 的表达上调,在hsa-miR-223-3p表达上调后再用高糖刺激,用qRT-PCR方法检测高糖刺激下hsa-miR-223-3p和靶基因mRNA的变化,并再次用内皮因子VEGF、ET1和纤维化指标αSMA、FN1的变化评估上调hsa-miR-223-3p后高糖刺激对内皮细胞的影响是否被挽回。[结果]（1）高糖刺激HRGECs,hsa-miR-223-3p的表达明显下调（p＜0.05）,IL6ST表达明显上调（p＜0.01）,PRKCE的改变无明显差异。（2）双荧光素酶靶点验证实验证明hsa-miR-223-3p的能与IL6ST的3’UTR区结合并下调IL6ST的表达（p＜0.01）。（3）高糖刺激后,HUVECs的形态和迁移速率均发生变化,增殖速率下降;hsa-miR-223-3p表达下调（p＜0.01）,IL6ST的表达上调（p＜0.001）,内皮因子VEGF、ET1和纤维化指标αSMA、FN1均表现为上调,IL6ST下游蛋白STAT3 和 ERK1/2 被激活。（4）使用 hsa-miR-223-3p-mimic 上调 HUVECs 中hsa-miR-223-3p的表达,hsa-miR-223-3p的上调能够抑制但不能完全抑制高糖刺激引起的IL6ST（p＜0.01）、VEGF（p＜0.001）和ET1（p＜0.05）的上调,而纤维化指标αSMA、FN1无明显改变。[结论]（1）IL6ST是hsa-miR-223-3p的靶基因。（2）高糖刺激能够导致HRGECs和HUVECs中hsa-miR-223-3p的下调以及IL6ST表达的上调,并激活下游STAT3和ERK1/2通路。（3）高糖刺激能导致HUVECs发生多种改变,包括形态和迁移速率改变、增殖速率下降,hsa-miR-223-3p可能为引发血管炎症反应的起始因素之一。（4）上调hsa-miR-223-3p在HUVECs中的表达,能够抑制IL6ST下游激活引发的炎症反应,同时抑制了内皮细胞的增殖修复,从而打破内皮细胞损伤和修复的动态平衡。
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