胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤，在我国的发病率占原发脑肿瘤的31.1％，其中，胶质母细胞瘤（GBM, Glioblastoma Mutiforme）恶性程度最高，大约占胶质瘤的30%。GBM常呈侵袭性生长，与正常脑组织界限不明确，手术效果不佳并具有放疗抗性，尽管目前临床GBM的标准治疗方案是“手术+放疗+替莫唑胺（TMZ， Temozolomide）辅助化疗”，但整体预后不良，据统计，我国GBM患者的中位生存期仅为14.4个月。近年来，放疗技术发展迅速，但GBM放疗抵抗依然是临床治疗中面临的难题。研究表明，受照胶质瘤细胞的死亡主要通过自噬途径发生而不是凋亡，因此，围绕自噬开展针对GBM细胞的有效靶点及放疗敏感性研究是当今放射医学领域的热点问题。　　肿瘤翻译控制蛋白（TCTP,Translationally controlled tumor protein）是一种高度保守的亲水性小分子蛋白，广泛存在于真核组织细胞中，具有参与转录和翻译、调节细胞周期、抗凋亡、促进肿瘤形成和DNA损伤修复等多种重要功能，此外，TCTP的异常高表达与胶质瘤的临床病理分级及预后密切相关。　　尽管尚无直接证据表明TCTP参与调控肿瘤细胞的自噬，但已有研究证实，与TCTP直接相关的多个DNA损伤修复关键蛋白、应激反应和抗凋亡分子通路均在自噬调控中发挥重要作用，例如，缺氧和糖尿病状态下，TCTP可以通过AMPK通路或作为鸟苷酸转化因子调控mTORC1活性，而mTORC1复合物是自噬起始阶段最关键的复合物；从分子结构上分析，TCTP的N末端具有与Bcl-2家族蛋白BH3结构域结合的能力，而自噬起始阶段关键蛋白Beclin1已被证实为一种新的BH3-only蛋白，因此，TCTP在结构上既具有同Beclin1直接结合的可能，也具有影响Bcl-xL和Beclin1结合的可能。　　本研究旨在阐明TCTP在受照GBM细胞自噬发生中的作用及其对细胞放疗敏感性的影响，通过围绕TCTP-mTORC1和TCTP-Beclin1开展相关分子机制研究，为寻找针对GBM细胞辐射抵抗的关键靶分子提供理论和实验依据。研究采用AVO染色、自噬特异性染色、mRFP-GFP-LC3腺病毒感染、透射电镜和蛋白质印记（WB， Western blot）等方法对受照胶质瘤细胞自噬流的变化进行动态监测；采用药物抑制或基因干扰的方法研究TCTP在受照GBM细胞自噬发生中的作用及相关分子机制；采用划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力；采用MTT、克隆形成和裸鼠成瘤实验等综合评估TCTP调控自噬对GBM细胞辐射敏感性的影响。　　研究主要发现：　　1.受照GBM细胞的自噬发生规律：与正常对照组相比，2Gy分割照射（≥5次）可引起胶质瘤细胞内p-mTORC1水平升高和自噬抑制；单次6Gy X射线辐照后1-3天，细胞内TCTP蛋白表达显著增多，照后4-7天，TCTP表达量逐渐降低，辐照后5到7天，Autophagy Assay Kit染色、mRFP-GFP-LC3腺病毒感染实验和透射电镜结果显示，细胞内的自噬体和自噬溶酶体结构显著增多，Western Blot结果表明，自噬标记蛋白Beclin1和LC3B的表达增加，提示受照胶质瘤细胞的自噬性死亡主要发生在辐照后5-7天。　　2. TCTP在受照GBM细胞自噬激活中的作用：筛选出针对GBM细胞有效抑制TCTP表达的药物：甲硫哒嗪和双氢青蒿素。实验显示，利用药物抑制受照GBM细胞的TCTP表达，辐照后48h，自噬标记物LC3B-II/I比例显著升高、p62表达降低，荧光染色和透射电镜结果进一步证实细胞内自噬发生；采用基因干扰技术（小干扰RNA或构建稳转低表达胶质瘤细胞系）抑制TCTP表达，结果与之一致，提示TCTP在受照胶质瘤细胞自噬的发生中发挥抑制作用。　　3.TCTP参与调控Beclin1复合物功能和ATM-AMPK-mTOR信号通路：蛋白质共沉淀（CoIP，Co-Immunoprecipitation）和荧光共定位实验均证实，GBM细胞受到辐照后，TCTP与Beclin1的共定位表达显著增强，同时，过表达TCTP可抑制Beclin1与Vps34结合，相反，低表达TCTP可以促进二者的结合；WB结果显示，抑制TCTP表达，受照GBM细胞在辐照后48h即出现ATM-AMPK通路激活、mTOR抑制，从而激活自噬，提示TCTP可以通过ATM-AMPK通路调控自噬的发生。　　4.激活自噬或抑制TCTP均可有效提高GBM细胞的辐射敏感性：使用雷帕霉素激活受照GBM细胞自噬发生，细胞的划痕愈合能力明显降低，MTT增殖曲线下移；稳转低表达TCTP的GBM细胞受到辐照后，MTT实验表明细胞生存能力显著降低，Transwell实验显示细胞的迁移能力降低，双氢青蒿素在抑制TCTP激活自噬的同时可抑制受照胶质瘤细胞增殖和迁移。　　5.在体实验证实抑制TCTP可提高GBM的放疗敏感性：裸鼠移植瘤实验表明，腹腔注射双氢青蒿素可有效抑制脑肿瘤组织中的 TCTP表达、降低受照荷瘤小鼠的移植瘤质量，同时伴随自噬标记物LC3B-II/I的比例显著增加。　　6. TCTP影响胶质瘤患者的预后：通过检索TCGA数据库，分析GBM患者临床和基因组数据发现，TCTP基因TPT1突变（缺失性为主）可显著延长GBM患者的中位生存期和无病生存期，同时，TPT1突变脑组织中的TP53/PTEN蛋白平均表达水平增加，伴随EGFR蛋白表达降低；接受标准放疗患者中，TCTP mRNA高表达者中位生存期明显缩短。　　研究结论：　　1.TCTP参与抑制受照GBM细胞的自噬发生。一方面，TCTP通过与Beclin1相互作用而影响Beclin1-Vps34复合物功能，另一方面，辐照后48h，TCTP可抑制ATM-AMPK信号通路，进而激活mTOR并抑制自噬发生。　　2.离体条件下，激活自噬或通过抑制TCTP激活自噬，均可提高GBM细胞的辐射敏感性；　　3.甲硫哒嗪和双氢青蒿素可有效抑制GBM细胞TCTP的表达，其中，双氢青蒿素可提高移植瘤裸鼠的放疗敏感性并激活GBM细胞自噬，提示TCTP参与调控受照GBM细胞的自噬并影响其辐射敏感性。　　4.TCTP影响胶质瘤患者放疗效果和预后。