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研究目的：
胃癌(Gastric cancer，GC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均较高。GC发病有明显的地域差异，好发于50岁以上人群，男性居多。GC早期无明显症状，少数患者出现饱胀不适、嗳气等轻微症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状类似，不易引起重视，因此，目前GC的早期诊断率仍较低。即使在治疗方面取得了重大进展，但我国大多数GC患者的诊断仍较晚，预后差，生存率较低。
肿瘤发展是一个多因素参与和多步骤完成的复杂过程。近年来，免疫球蛋白超家族(lmmunoglobulin superfamily，IgSF)的连接粘附分子(Junctional adhesion molecules，JAMs)在白细胞募集和炎性修复中的作用引起了广泛的关注。JAMs可在炎症条件下增强白细胞募集和白细胞迁移。JAMs家族成员、柯萨奇与腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor，CAR)和内皮选择性粘附分子(endothelial-selective adhesion molecule，ESAM)通过相互作用调节各种免疫细胞的粘附和迁移。近年来，JAMs在肿瘤发生发展中的作用也引起了广泛关注。目前的研究发现，肿瘤的发生与JAMs蛋白表达水平的增加有关，而JAMs蛋白表达的增加与预后不良有关。其机制可能是由于肿瘤细胞在局部浸润和转移扩散过程中向基质迁移和跨血管壁转运的能力增强。连接粘附分子样蛋白（Junctional adhesion molecule-like protein，JAML）是JAMs的新成员，它包括两个胞外免疫球蛋白样结构域、一个跨膜片段和一个胞质尾巴。JAML蛋白位于细胞之间接触区域的细胞质膜上。已经发现JAML在中性粒细胞、单核细胞、记忆T细胞及上皮γδT细胞等多种先天性和适应性免疫细胞中表达，介导各种免疫细胞和内皮/上皮细胞的黏附和迁移过程，最终调节炎症反应。但是，JAML在肿瘤组织中是否表达，其在肿瘤发生发展中是否具有重要作用目前尚无研究。本课题将探讨JAML在GC细胞中的表达情况，分析JAML对GC生物学行为的影响，并探究JAML对GC发生作用的分子机制，为寻找GC治疗新靶点提供理论依据。
研究方法：
1.于山东大学附属济南市中心医院共收集63例GC组织及相应癌旁组织标本，根据AJCC/UICC第8版对标本的病理学结果进行分析。应用免疫组织化学染色方法，检测GC组织及相应癌旁组织中JAML的表达情况，并统计分析JAML在肿瘤组织中的表达与临床病理参数之间的关系。
2.通过Western blot实验，检测JAML在HGC-27、BGC-823、SGC-7901三种GC细胞中的表达情况。
3.通过瞬时转染技术，对JAML高表达细胞株BGC-823转染小干扰RNA(sijAML)下调JAML的表达，对JAML低表达细胞株HGC-27转染JAML质粒上调JAML的表达，用Western blot实验检测转染效率;通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化;通过EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)DNA细胞增殖实验检测细胞增殖能力的变化。
4.通过Western blot实验，检测JAML的表达与丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)磷酸化的关系，包括ERK(Extracellular signal-regulated Kinase)、p38和JNK(C-Jun NH2-terminal kinase)。使用p38信号通路抑制剂SB-203580处理JAML过表达的GC细胞，用相应实验检测细胞迁移和增殖能力的变化。
研究结果：
1.JAML在GC组织中高表达且与预后不良因素相关。
免疫组织化学分析结果显示：JAML在癌细胞的细胞质和细胞膜中表达。与癌周组织相比，JAML在GC组织中的表达显著上调。JAML在癌细胞中的高表达与细胞分化不良(P=0.002)、局部淋巴结受累(P=0.012)、浸润深度(P=0.026)和肿瘤病理分期(P=0.021)有关。
2.JAML的表达促进GC细胞增殖和迁移。
对高表达JAML的BGC-823细胞株下调JAML表达后，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力降低;细胞划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移能力降低。
对低表达JAML的HGC-27细胞株上调JAML表达后，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力升高;细胞划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移能力升高。
3.JAML通过激活p38信号通路诱导GC细胞恶性生物学行为。
Western blot实验结果显示转染siRNA下调GC细胞的JAML表达后，p38的磷酸化被明显抑制，而ERK和JNK的磷酸化无明显变化。
用p38信号通路抑制剂处理JAML过表达细胞后，Western blot实验结果显示p38的磷酸化被显著下调，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力降低;细胞划痕实验显示细胞迁移能力降低。
研究结论：
1.首次发现JAML在GC组织中高表达：JAML在GC组织中高表达且与细胞分化不良、局部淋巴结受累、浸润较深和较高病理分期等预后不良因素明显相关。
2.首次证明JAML促进GC的恶性进程：JAML高表达促进GC细胞增殖和迁移等恶性生物学行为。
3.初步探讨了JAML促进GC进展的机制：JAML通过激活p38信号通路诱导GC细胞恶性生物学行为。
综上所述，本研究发现JAML在人GC组织中高表达并促进了GC的发展，部分原因是增强了p38信号通路的激活。JAML将有可能作为GC发生发展检测的重要指标和GC治疗的潜在靶点。
胃癌(Gastric cancer，GC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均较高。GC发病有明显的地域差异，好发于50岁以上人群，男性居多。GC早期无明显症状，少数患者出现饱胀不适、嗳气等轻微症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状类似，不易引起重视，因此，目前GC的早期诊断率仍较低。即使在治疗方面取得了重大进展，但我国大多数GC患者的诊断仍较晚，预后差，生存率较低。
肿瘤发展是一个多因素参与和多步骤完成的复杂过程。近年来，免疫球蛋白超家族(lmmunoglobulin superfamily，IgSF)的连接粘附分子(Junctional adhesion molecules，JAMs)在白细胞募集和炎性修复中的作用引起了广泛的关注。JAMs可在炎症条件下增强白细胞募集和白细胞迁移。JAMs家族成员、柯萨奇与腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor，CAR)和内皮选择性粘附分子(endothelial-selective adhesion molecule，ESAM)通过相互作用调节各种免疫细胞的粘附和迁移。近年来，JAMs在肿瘤发生发展中的作用也引起了广泛关注。目前的研究发现，肿瘤的发生与JAMs蛋白表达水平的增加有关，而JAMs蛋白表达的增加与预后不良有关。其机制可能是由于肿瘤细胞在局部浸润和转移扩散过程中向基质迁移和跨血管壁转运的能力增强。连接粘附分子样蛋白（Junctional adhesion molecule-like protein，JAML）是JAMs的新成员，它包括两个胞外免疫球蛋白样结构域、一个跨膜片段和一个胞质尾巴。JAML蛋白位于细胞之间接触区域的细胞质膜上。已经发现JAML在中性粒细胞、单核细胞、记忆T细胞及上皮γδT细胞等多种先天性和适应性免疫细胞中表达，介导各种免疫细胞和内皮/上皮细胞的黏附和迁移过程，最终调节炎症反应。但是，JAML在肿瘤组织中是否表达，其在肿瘤发生发展中是否具有重要作用目前尚无研究。本课题将探讨JAML在GC细胞中的表达情况，分析JAML对GC生物学行为的影响，并探究JAML对GC发生作用的分子机制，为寻找GC治疗新靶点提供理论依据。
研究方法：
1.于山东大学附属济南市中心医院共收集63例GC组织及相应癌旁组织标本，根据AJCC/UICC第8版对标本的病理学结果进行分析。应用免疫组织化学染色方法，检测GC组织及相应癌旁组织中JAML的表达情况，并统计分析JAML在肿瘤组织中的表达与临床病理参数之间的关系。
2.通过Western blot实验，检测JAML在HGC-27、BGC-823、SGC-7901三种GC细胞中的表达情况。
3.通过瞬时转染技术，对JAML高表达细胞株BGC-823转染小干扰RNA(sijAML)下调JAML的表达，对JAML低表达细胞株HGC-27转染JAML质粒上调JAML的表达，用Western blot实验检测转染效率;通过细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化;通过EdU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)DNA细胞增殖实验检测细胞增殖能力的变化。
4.通过Western blot实验，检测JAML的表达与丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)磷酸化的关系，包括ERK(Extracellular signal-regulated Kinase)、p38和JNK(C-Jun NH2-terminal kinase)。使用p38信号通路抑制剂SB-203580处理JAML过表达的GC细胞，用相应实验检测细胞迁移和增殖能力的变化。
研究结果：
1.JAML在GC组织中高表达且与预后不良因素相关。
免疫组织化学分析结果显示：JAML在癌细胞的细胞质和细胞膜中表达。与癌周组织相比，JAML在GC组织中的表达显著上调。JAML在癌细胞中的高表达与细胞分化不良(P=0.002)、局部淋巴结受累(P=0.012)、浸润深度(P=0.026)和肿瘤病理分期(P=0.021)有关。
2.JAML的表达促进GC细胞增殖和迁移。
对高表达JAML的BGC-823细胞株下调JAML表达后，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力降低;细胞划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移能力降低。
对低表达JAML的HGC-27细胞株上调JAML表达后，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力升高;细胞划痕实验和Transwell实验显示细胞迁移能力升高。
3.JAML通过激活p38信号通路诱导GC细胞恶性生物学行为。
Western blot实验结果显示转染siRNA下调GC细胞的JAML表达后，p38的磷酸化被明显抑制，而ERK和JNK的磷酸化无明显变化。
用p38信号通路抑制剂处理JAML过表达细胞后，Western blot实验结果显示p38的磷酸化被显著下调，EdU细胞增殖实验显示细胞增殖能力降低;细胞划痕实验显示细胞迁移能力降低。
研究结论：
1.首次发现JAML在GC组织中高表达：JAML在GC组织中高表达且与细胞分化不良、局部淋巴结受累、浸润较深和较高病理分期等预后不良因素明显相关。
2.首次证明JAML促进GC的恶性进程：JAML高表达促进GC细胞增殖和迁移等恶性生物学行为。
3.初步探讨了JAML促进GC进展的机制：JAML通过激活p38信号通路诱导GC细胞恶性生物学行为。
综上所述，本研究发现JAML在人GC组织中高表达并促进了GC的发展，部分原因是增强了p38信号通路的激活。JAML将有可能作为GC发生发展检测的重要指标和GC治疗的潜在靶点。