桑黄多糖分离纯化及其药理作用研究

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桑黄(Phellinus baumii)是一种具有多种药理作用的真菌子实体,因寄生于桑树而得名。现代药理学研究发现桑黄多糖具有抗肿瘤、抗炎症、抗氧化、降血糖、免疫调节、护肝等多种药理作用。本论文主要以桑黄子实体粗多糖以及分离纯化得到的纯多糖为研究对象,研究其抗癌和免疫调节作用机制,为桑黄多糖综合开发提供科学依据。研究内容如下:  1)采用超声波辅助热水浸提法提取桑黄粗多糖,优化了料液比、提取温度和提取时间这三个工艺条件。当料液比为1∶26,提取温度为100℃,提取时间为4.35 h时,桑黄多糖的平均提取得率为1.645%,其与理论预测值相比的相对误差为3.58%,说明试验建立的桑黄多糖提取得率回归预测模型具有较好的拟合性。研究结果为桑黄的深度开发利用提供了依据。  2)将用超声波辅助热水浸提法提取到的桑黄粗多糖,用DEAE离子交换柱和Sephacryl S400/S200凝胶柱进行纯化,再用红外光谱扫描仪进行定性检测。结果得到了较为均一的桑黄多糖(PBPP),这为后续研究桑黄多糖的药理作用奠定了基础。  3)通过抗DPPH、抗羟自由基和还原能力试验,研究桑黄多糖的抗氧化能力。与阴性对照组相比,试验组在统计学上均达到显著性水平,说明桑黄多糖具有抗氧化作用。  4)通过CCK-8法检测桑黄多糖对HELA和SGC-7901两种细胞系的增殖影响,结果表明桑黄多糖能显著抑制HELA和SGC-7901细胞的增殖,表现出一定的抗癌效果。分析细胞周期图谱后发现,桑黄多糖对HELA细胞的抑制作用主要是通过将细胞分裂阻滞在G2期,对SGC-7901细胞的抑制作用主要是通过将细胞阻滞在S期,表明桑黄多糖通过阻碍细胞分裂以实现抗癌作用。  5)分别采用CCK-8法、中性红试验法、免疫细胞因子检测法、细胞周期检测法,研究桑黄多糖对RAW264.7细胞的增殖、吞噬能力、分泌免疫因子及分裂的影响。试验发现桑黄多糖能促进RAW264.7细胞增殖,增强其吞噬能力,促进其分泌IL-6和TNF-α细胞因子,并增强细胞周期中的S期。结果表明,桑黄多糖具有明显的免疫调节活性。
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