【摘 要】
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目的:通过检测淫羊藿素(ICT)对TDP-43感染SH-SY5Y细胞中自噬相关蛋白表达的影响,探索ICT对TDP-43感染SH-SY5Y细胞损伤模型的保护作用及其机制。方法:用加载有TDP-43基因的病毒感染生长状态良好的SH-SY5Y细胞构建TDP-43诱导的神经细胞损伤模型,通过CCK-8法检测不同感染时间细胞活力变化以确定最佳感染时间。感染后通过实时荧光定量PCR(q PCR)检测TDP-4
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目的:通过检测淫羊藿素(ICT)对TDP-43感染SH-SY5Y细胞中自噬相关蛋白表达的影响,探索ICT对TDP-43感染SH-SY5Y细胞损伤模型的保护作用及其机制。方法:用加载有TDP-43基因的病毒感染生长状态良好的SH-SY5Y细胞构建TDP-43诱导的神经细胞损伤模型,通过CCK-8法检测不同感染时间细胞活力变化以确定最佳感染时间。感染后通过实时荧光定量PCR(q PCR)检测TDP-43m RNA的表达水平及Western blot检测TDP-43的表达水平以验证模型建立成功。用1μmol/L ICT对TDP-43细胞损伤模型进行药物干预48小时,用CCK-8法检测药物干预前后细胞活力变化,同时通过Western blot法检测TDP-43细胞损伤模型在药物干预前后TDP-43蛋白及凋亡蛋白Caspase-3、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II/I、p62表达水平变化,以评估ICT干预TDP-43诱导SH-SY5Y细胞损伤模型的效果及可能机制。结果:加载有TDP-43基因的病毒感染SH-SY5Y细胞12 h后,通过CCK-8法检测示TDP-43组细胞活力较CON组下降,q PCR说明TDP-43组的TDP-43的m RNA表达水平较CON组上升,Western blot验证TDP-43组的TDP-43表达水平较CON组上升,以上均说明TDP-43感染SH-SY5Y细胞损伤模型建立成功。以1μmol/L的ICT干预模型48 h后发现,与TDP-43组比较,TDP-43+ICT组细胞活力上升,TDP-43的表达水平下降,凋亡蛋白Caspase-3及自噬蛋白Beclin-1、LC3-II/I表达水平均下降,而自噬蛋白p62的表达水平升高。结论:ICT对TDP-43感染的SH-SY5Y细胞损伤模型有保护作用,该保护作用可能与调控TDP-43,抑制Caspase-3、Beclin-1及LC3-II/I及的表达同时促进p62蛋白表达有关。
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