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目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人鼻咽癌化疗耐药的逆转耐药作用,并通过细胞实验,研究其逆转耐药的相关机制,为克服鼻咽癌化疗耐药,提高鼻咽癌疗效,提供实验数据及理论基础。材料与方法:首先通过倒置显微镜观察CNE2和CNE2/DDP的细胞形态差别,然后验证CNE2/DDP细胞的耐药性:用不同阶梯浓度的顺铂（DDP）处理CNE2、CNE2/DDP细胞,CCK8法检测其增殖抑制率,从而得到各自的IC50,再通过计算得到CNE2/DDP细胞的耐药指数,进一步为了证明EGCG的逆转耐药作用,我们首先运用CCK8法检测不同浓度EGCG下的增殖抑制率,绘制抑制率折线图,当抑制率小于5%时,可相当于该药物对此细胞的抑制作用几乎可以忽略不计,因此可排除该药物本身作用的影响,所以我们选用抑制率小于5%的最大浓度作为后续的实验浓度,实验设立了三组:1.对照组、2.顺铂组、3.顺铂+EGCG组,运用CCK8法计算各组的增殖抑制率,从而计算每组的IC50,最后计算EGCG对CNE2/DDP顺铂耐药株的逆转耐药倍数,采用实时荧光定量PCR（Real time PCR）检测三组中P-gp m RNA的相对表达量,采用Western blot（蛋白免疫印迹法）法检测三组中P-gp、caspase3及cleaved-caspase3的表达,通过对比各组P-gp m RNA相对表达量情况及各组P-gp、caspase3及cleaved-caspase3蛋白表达情况,探讨EGCG作用于CNE2/DDP细胞,逆转化疗耐药性的相关机制。结果:1.倒置显微镜下可见CNE2形态规则,呈铺路石样,紧密而规整,但CNE2/DDP细胞普遍大于CNE2细胞,且排列混乱,不规则,视野较为浑浊,因CNE2/DDP细胞胞质中可见大量颗粒状物质,因其生长较慢,同样时间培养下CNE2/DDP细胞排列稀疏,且CNE2/DDP细胞中多核巨细胞易见。2.利用不同浓度的顺铂（1.4μg/m L、2.8μg/m L、5.6μg/m L、11.2μg/m L）分别作用于CNE2细胞48h后,CCK8计算对CNE2细胞的增殖抑制率分别为:37.27%、46.01%、61.51%、90.54%;利用不同浓度的顺铂（1.4μg/m L、2.8μg/m L、5.6μg/m L、11.2μg/m L）分别作用于CNE2/DDP细胞48h后,CCK8计算对CNE2/DDP细胞的增殖抑制率分别为:12.17%、16.54%、22.04%、50.94%。用SPSS23.0计算CNE2细胞的IC50为2.74μg/m L,CNE2/DDP细胞的IC50则为13.233μg/m L。CNE2/DDP细胞的耐药指数RI=IC50（CNE2/DDP）/IC50（CNE2）=4.83。结果均具有统计学意义（P＜0.05）。3.先通过检测不同浓度EGCG增殖抑制率绘制折线图,从而选择5%以下增殖抑制率的浓度作为后续的实验浓度,EGCG作用于CNE2/DDP细胞,48h后,CCK8法测各浓度的增殖抑制率分别为:10μg/m L:1.27%;20μg/m L:5.14%;40μg/m L:13.36%;80μg/m L:27.56%;160μg/m L:43.47%。浓度为10μg/ml的EGCG作用后细胞增殖抑制率小于5%,故将其设置为后续实验浓度。4.不同浓度顺铂与10μg/ml的EGCG联合作用于CNE2/DDP细胞,48h后,CCK8法计算细胞增殖抑制率分别为:24.55%、24.02%、36.67%、57.46%;通过计算IC50为8.861μg/ml。耐药逆转倍数RI==IC50（顺铂组）/IC50（顺铂+EGCG）=1.49,差异具有统计学意义（P＜0.05）。5.顺铂组与对照组相比,P-gp m RNA表达明显上调,顺铂+EGCG组与顺铂组相比,P-gp m RNA表达显著下调,结果均具有统计学意义（P＜0.05）。6.顺铂实验组与空白对照组相比,wb结果表示:P-gp的蛋白表达量稍上调,但其差异无统计学意义（P＞0.05）。顺铂+EGCG组与顺铂组相比,P-gp蛋白表达明显下调,且差异具有统计学意义（P＜0.05）。顺铂组与对照组相比,caspase3蛋白表达明显上调,顺铂+EGCG组与对照组和顺铂组相比,caspase3蛋白表达显著上调,均具有统计学意义（P＜0.05）。顺铂组与对照组相比,cleavedcaspase3蛋白表达上调,顺铂+EGCG组与对照组和顺铂组相比,cleaved-caspase3蛋白表达明显上调,差异均具有统计学意义（P＜0.05）,Wb的结果可说明:EGCG的作用靶点可能是p-gp,或是凋亡蛋白caspase3。结论:EGCG能逆转人鼻咽癌CNE2/DDP细胞对顺铂的耐药,其机制可能与降低细胞中P-gp的m RNA及蛋白的表达,增加caspase3、cleaved-caspase3的蛋白表达有关。