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目的:研究青蒿素衍生物DHA27联合氨基糖苷类抗生素妥布霉素对铜绿假单胞菌的抗菌增敏作用。方法:一、DHA27联合多种临床常用抗菌药物发挥抗菌增敏作用的研究1.微孔二倍稀释法测定DHA27和临床常用多种抗菌药物对多种细菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）。2.棋盘式微孔稀释法测定DHA27与多种临床常用抗菌药物联合使用对多种细菌的部分协同抑菌浓度（fractional inhibitory concentration index,FICI）。3.DHA27与多种临床常用抗菌药物联合使用对细菌24 h生长曲线的影响。二、DHA27联合妥布霉素对亚致死剂量铜绿假单胞菌攻击脓毒症小鼠模型的保护作用1.选择铜绿假单胞菌攻击的脓毒症小鼠模型的菌株。测定DHA27和妥布霉素联合加药对细菌24h生长曲线的影响,选择发挥最佳协同抗菌作用的铜绿假单胞菌临床菌株。2.亚致死剂量细菌攻击脓毒症小鼠模型的建立。尾静脉注射不同浓度PA16菌液（0.1 m L/20 g）,正常给予食物和水,观察小鼠7天死亡率。3.DHA27联合妥布霉素对亚致死剂量细菌攻击小鼠脓毒症模型的保护作用。对亚致死剂量细菌攻击小鼠模型给予DHA27以及妥布霉素,细菌攻击24 h后取得小鼠血液、脾脏和肺脏进行细菌载荷量和ELISA法测定IL-1β和IFN-γ水平。4.DHA27在小鼠体内血药浓度的测定三、DHA27联合妥布霉素发挥抗菌增敏作用的机制研究1.DHA27对药物在菌体内聚集的影响2.DHA27联合妥布霉素对铜绿假单胞菌形态的影响3.DHA27对16Sr RNA甲基化转移酶m RNA表达的影响4.DHA27对氨基糖苷类钝化酶m RNA表达的影响5.DHA27对妥布霉素代谢产物的影响结果:一、DHA27联合多种临床常用抗菌药物发挥抗菌增敏作用的研究1.DHA27没有明显直接抗菌作用;根据2020年美国临床实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI）中对于不同细菌的抗菌药物试验结果,分别选择对细菌产生耐药的抗菌药物进行后续协同抗菌实验研究。2.研究发现在铜绿假单胞菌标准菌株中DHA27分别联合妥布霉素和多粘菌素B具有协同抗菌作用;在肺炎克雷伯菌标准菌株中DHA27分别联合阿奇霉素和环丙沙星具有协同抗菌作用;在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准菌株中DHA27联合苯唑西林具有协同抗菌作用。3.在上述具有协同抗菌作用的药物配伍中,发现DHA27联合多粘菌素B可以抑制铜绿假单胞菌生长,DHA27联合环丙沙星可以抑制肺炎克雷伯菌生长;在铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌中,DHA27分别联合妥布霉素和阿奇霉素具有一定抗菌增敏的作用。二、DHA27联合妥布霉素对亚致死剂量铜绿假单胞菌攻击小鼠脓毒症模型的保护作用1.DHA27联合妥布霉素在PA16中可以最明显的增加妥布霉素对细菌的敏感性,进一步选择PA16临床菌株建立细菌攻击小鼠脓毒症模型。2.PA16细菌攻击浓度为3.0×10~8CFU/kg时,小鼠24 h内存活率为100%,便于接下来实验中能够在小鼠存活期间获得所需血液和脾肺标本以检测细菌载荷量及前炎症因子水平。3.DHA27联合妥布霉素可以降低小鼠脾肺中细菌载荷量,以及降低小鼠脾肺中IL-1β、IFN-γ水平。4.小鼠体内DHA27达到稳定的血药浓度时,根据体表面积换算到体外实验药物浓度后,发现并未达到体外实验中发挥抗菌增敏作用的DHA27浓度,发现较低浓度DHA27仍可发挥一定协同抗菌作用。三、DHA27联合妥布霉素发挥抗菌增敏作用的机制研究1.DHA27并未显著增加柔红霉素在铜绿假单胞菌菌体内聚集。2.DHA27联合妥布霉素加药组与妥布霉素组相比,DHA27联合加药并未对细菌菌体形态有明显破坏作用。3.DHA27联合妥布霉素发挥抗菌增敏作用与抑制铜绿假单胞菌临床分离菌株中相应16Sr RNA甲基化酶m RNA的表达无关。4.DHA27联合妥布霉素发挥抗菌增敏作用与抑制铜绿假单胞菌临床分离菌株中相应氨基糖苷钝化酶m RNA的表达相关,尤其与乙酰转移酶aac（3）-Ⅱm RNA表达密切相关。结论:1.DHA27联合妥布霉素对铜绿假单胞菌具有抗菌增敏作用;2.DHA27联合妥布霉素可减少铜绿假单胞菌攻击的脓毒症模型小鼠脾脏、肺脏组织中细菌载荷量,并降低小鼠脾脏、肺脏组织中IL-1β和IFN-γ水平;3.DHA27的抗菌增敏作用与其抑制铜绿假单胞菌中氨基糖苷类钝化酶m RNA表达相关,尤其是与抑制乙酰转移酶aac（3）-Ⅱm RNA表达密切相关,而与破坏菌体形态、增加药物在菌体内积聚和抑制16Sr RNA甲基化酶m RNA的表达无关。