神经突起生长是神经细胞再生和可塑性的一个重要过程,特别是在神经细胞损伤之后。最近的大量研究表明很多Gαi/o蛋白耦联受体在神经突起生长的过程中发挥重要作用。神经肽FF(NPFF)系统的两种Gαi/o蛋白耦联受体——NPFF1和NPFF2受体,主要分布于中枢神经系统。为了探讨NPFF系统是否参与Neuro 2A细胞神经突起的生长,本论文利用体外神经突实验检测了NPFF及其相关肽对Neuro 2A细胞神经突起生长的影响,并利用体外cAMP功能实验、实时定量PCR和免疫印迹等实验技术来研究其作用机制。实验结果表明Neuro 2A细胞内源性地表达NPFF2受体,并且NPFF2受体选择性激动剂dNPA在Neuro 2A细胞中可以剂量依赖的抑制forskolin(5μm)引起cAMP的积累。并且,本研究发现NPFF受体的激动剂NPFF和dNPA可以剂量依赖的促进Neuro 2A细胞神经突起的生长,这种效应可以被NPFF受体拮抗剂RF9(1μm)完全阻断。进一步研究发现,MAPK的抑制剂U0126(10μm)?SP600125(10μm)和SB203580(10μm)对Neuro 2A细胞预处理后,可以有效抑制dNPA诱导的神经突起生长。此外,dNPA(1μm)在Neuro 2A细胞中可以引起ERK1/2?JNK和p38的磷酸化水平升高,并且该调节作用可以被U0126(10μm)?SP600125(10μm)和SB203580(10μm)的预处理完全抑制。上述结果表明NPFF受体激动剂dNPA通过激活Neuro 2A细胞中的NPFF2受体,并由MAPK信号通路来促进神经突起的生长。已有研究表明Neuro 2A细胞内源性表达大麻Gαi/o蛋白耦联受体CB1,并且激活CB1受体可以促进神经突起的生长,其作用机制是通过ERK1/2信号通路和JNK信号通路;此外,已有的研究表明大麻系统和NPFF系统在痛觉调节过程中具有功能性的相互作用。本论文进一步探讨了NPFF和大麻系统在Neuro 2A细胞神经突起生长的过程中是否存在相互作用。实验结果表明,大麻受体激动剂WIN55,212-2(1μm)可以促进Neuro 2A细胞神经突起的生长,当它和dNPA(1μm)一起作用于Neuro 2A细胞时,它们所引起的促进神经突起生长的作用被明显地抑制。此外,WIN55,212-2(1μm)和dNPA(1μm)均可以单独引起ERK1/2和JNK的磷酸化水平升高,但当它们同时作用于Neuro 2A细胞时,ERK1/2和JNK磷酸化水平的升高和它们各自引起的ERK1/2和JNK的磷酸化水平升高并没有显著差别。因此,以上结果表明WIN55,212-2和dNPA通过以非ERK1/2和JNK信号通路的方式相互抑制对Neuro2A细胞神经突起生长的影响。综上所述,Neuro 2A细胞内源性的表达NPFF2受体,dNPA通过激活MAPK信号通路促进神经突起的生长;dNPA与WIN55,212-2在促进神经突起生长方面以非MAPK信号通路的方式具有相互抑制作用。因此,本研究拓宽了NPFF系统的生理功能,并且进一步证实了NPFF系统和大麻系统之间存在着相互调节的关系。