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红藻是一类多生长于温带海区潮间带、以多细胞为主的大型底栖藻类.红藻种类繁多,且含有丰富的藻红蛋白,能够有效利用450~650nm波段的可见光,在海洋生态系统的能量传递和物质循环中具有不可或缺的作用.实验以海生多管藻(Polysiphonia urceolata)为研究对象,制备藻红?藻蓝蛋白复合体(R-PE?R-PC),分析复合体中R-PE与R-PC之间的连接方式,研究能量在R-PE和R-PC之间的传递途径.
采用多维层析和非变性PAGE(Native-PAGE)制备纯度符合光吸收系数测定要求的R-藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP).选用更适合于多亚基复合体蛋白定量、以γ-球蛋白作标准的Hartree-Lowry法所获得的R-藻红蛋白(R-PE)、R-PC和AP的光吸收系数,建立了符合低浓度蛋白含量测定要求的、可用特征吸收值(Aλ)求得各藻胆蛋白含量比例的二元和三元线性方程组,并用于藻胆蛋白组成及其相对含量与比例分析.利用Native-PAGE、SDS-PAGE、尿素变性IEF、二维SDS-PAGE等电泳技术完成对R-藻蓝蛋白和R-PE?R-PC的亚基组成以及结构特性的分析.
藻胆体中藻胆蛋白组成分析表明:解离和完整藻胆体中R-PE、R-PC和AP物质的量比分别为7~9∶1∶1和11~13∶1∶3,这种组成差别源于完整藻胆体中R-PC和AP的分子间相互作用,且有利于光能的高效单向传递.
对藻蓝蛋白的亚基组成分析发现R-PC、R-PC2中都含有一个α和2个β亚基,且R-PC具有4种不同分子质量和等电点的β亚基:19.6β5.70PC、18.2β5.70PC、19.6β5.61PC、18.2β5.61PC,对于不同制备方式和存放条件下的R-PC,这四种β亚基的相对含量会发生变化.
在蔗糖密度梯度离心制备的大于六聚体R-PE和R-PE?R-PC电泳结果中:大于六聚体的R-PE含有4个分子质量和pI不相同的γ亚基,即γ7.91、γ8.091、γ8.281和γ8.092,其中γ8.092的相对比例应小于等于γ亚基总量的1/4,此外还有1个无色多肽38LR;R-PE?R-PC中除含有38LR外,还有一个无色多肽44.8LR.综合分析,44.8LR应可能为连接2个三聚体R-PC的连接多肽,38LR可能为参与R-PE?R-PC中R-PE与R-PC连接的"杆"结构域连接多肽,则R-PE?R-PC中含有的复合体结构单元形式应为:R-PE6-38LR-R-PC6(R-PE6-38LR-(R-PC3-44.8LR-R-PC3))、R-PE6?R-PE6-38LR-R-PC6.
采用多维层析和非变性PAGE(Native-PAGE)制备纯度符合光吸收系数测定要求的R-藻蓝蛋白(R-PC)和别藻蓝蛋白(AP).选用更适合于多亚基复合体蛋白定量、以γ-球蛋白作标准的Hartree-Lowry法所获得的R-藻红蛋白(R-PE)、R-PC和AP的光吸收系数,建立了符合低浓度蛋白含量测定要求的、可用特征吸收值(Aλ)求得各藻胆蛋白含量比例的二元和三元线性方程组,并用于藻胆蛋白组成及其相对含量与比例分析.利用Native-PAGE、SDS-PAGE、尿素变性IEF、二维SDS-PAGE等电泳技术完成对R-藻蓝蛋白和R-PE?R-PC的亚基组成以及结构特性的分析.
藻胆体中藻胆蛋白组成分析表明:解离和完整藻胆体中R-PE、R-PC和AP物质的量比分别为7~9∶1∶1和11~13∶1∶3,这种组成差别源于完整藻胆体中R-PC和AP的分子间相互作用,且有利于光能的高效单向传递.
对藻蓝蛋白的亚基组成分析发现R-PC、R-PC2中都含有一个α和2个β亚基,且R-PC具有4种不同分子质量和等电点的β亚基:19.6β5.70PC、18.2β5.70PC、19.6β5.61PC、18.2β5.61PC,对于不同制备方式和存放条件下的R-PC,这四种β亚基的相对含量会发生变化.
在蔗糖密度梯度离心制备的大于六聚体R-PE和R-PE?R-PC电泳结果中:大于六聚体的R-PE含有4个分子质量和pI不相同的γ亚基,即γ7.91、γ8.091、γ8.281和γ8.092,其中γ8.092的相对比例应小于等于γ亚基总量的1/4,此外还有1个无色多肽38LR;R-PE?R-PC中除含有38LR外,还有一个无色多肽44.8LR.综合分析,44.8LR应可能为连接2个三聚体R-PC的连接多肽,38LR可能为参与R-PE?R-PC中R-PE与R-PC连接的"杆"结构域连接多肽,则R-PE?R-PC中含有的复合体结构单元形式应为:R-PE6-38LR-R-PC6(R-PE6-38LR-(R-PC3-44.8LR-R-PC3))、R-PE6?R-PE6-38LR-R-PC6.