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纳米银通常是指尺寸在5-200nm之间的银颗粒。由于纳米银具有多种独特的性质,因此它已成为科学领域的研究热点之一,受到了越来越广泛的关注。已知纳米银有良好的抗菌作用,而越来越多的研究显示,纳米银对癌细胞也具有一定的细胞毒性,它能诱导细胞凋亡、改变细胞周期以及在细胞内产生氧化应激等,显示了其在生物医学领域的潜在的应用价值和前景。目前热疗已渐渐成为一项重要的癌症治疗手段,且显示出显著成效。本文以纳米银的细胞毒性和热对肿瘤细胞的杀伤作用为依据,研究纳米银联合热对人脑胶质瘤(U251)细胞的作用。本论文的主要工作和结果如下:
1.利用MTT法、光镜观察和流式细胞仪等手段分别研究不同尺寸纳米银在不同浓度下对U251细胞活力、形态、凋亡、周期以及ROS的影响。结果显示,纳米银对U251细胞具有一定的细胞毒性,且纳米银的细胞毒性具有尺寸依赖性和剂量依赖性,其粒径越小,浓度越高,对细胞的毒性就越大。流式细胞仪检测结果表明,纳米银能诱导U251细胞发生少量的细胞凋亡,但并不显著。同时,纳米银能诱导细胞在G2/M期发生阻滞,并引起细胞的氧化应激反应。
2.研究了不同的温度对U251细胞的作用。利用MTT法、光镜和荧光显微镜观察、石墨炉原子分光光度法等方法分别研究了不同温度作用于U251细胞不同的时间对细胞活力、形态及纳米银摄取的影响。结果表明,U251细胞在42-44℃下作用半个小时以上,细胞活力显著降低,且温度越高,作用时间越长,细胞活力下降越大。PI染色显示,热能使细胞的形态发生变化。42℃下作用半小时后,细胞对纳米银吞噬量有了显著增加。
3.将纳米银和热结合起来,研究了其对U251细胞进行作用,通过MTT检测法、克隆形成实验和流式细胞仪等研究了纳米银结合热对U251细胞活力、凋亡和周期的影响。其结果表明,纳米银结合热能使细胞的增殖率显著下降,诱导细胞凋亡显著增加,吖啶橙染色可以观察到细胞核固缩,凋亡小体等细胞凋亡现象。纳米银引起的U251细胞G2/M期阻滞现象在热作用之后被明显消除。