【摘 要】
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目的:探讨葛根素（Puerarin,Pue）在1型糖尿病（Type 1diabetes mellitus,T1DM）中的防治作用,为葛根素应用于T1DM的防治研究提供实验数据。方法:体外培养选用小鼠胰岛瘤细胞MIN6进行细胞实验。CCK8法筛选H2O2建立细胞损伤模型以及Pue保护作用的最佳条件;20μmol/L Pue单独预处理6 h、ERS抑制剂GSK2606414、JAK2激活剂Coumer
【基金项目】
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湖南省自然科学基金项目（14JJ3104）； 湖南省自然科学基金项目（2021JJ30585）； 湖南省教育厅（一般）项目（21C0280）； 南华大学学位与研究生教育教学改革项目（193YXJ029）； 南华大学 2020 年研究生科研创新项目（203YXC01
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目的:探讨葛根素（Puerarin,Pue）在1型糖尿病（Type 1diabetes mellitus,T1DM）中的防治作用,为葛根素应用于T1DM的防治研究提供实验数据。方法:体外培养选用小鼠胰岛瘤细胞MIN6进行细胞实验。CCK8法筛选H2O2建立细胞损伤模型以及Pue保护作用的最佳条件;20μmol/L Pue单独预处理6 h、ERS抑制剂GSK2606414、JAK2激活剂Coumermycin A1、抑制剂AG490单独预处理MIN6细胞1 h、或CA1联合Pue、AG490联合Pue预处理MIN6细胞6 h,再加入H2O2继续诱导MIN6细胞24 h,DCFH-DA流式法与WST-8比色法分别检测胞内ROS水平及T-SOD活性,CCK-8法联合流式细胞术、TUNEL与Hoechst 33258联合染色监测细胞活力与凋亡相关情况,WB法及免疫荧光技术检测JAK2/STAT3、ERS以及凋亡相关分子的表达与活化。结果:（1）Pue保护作用的最佳浓度和最佳预处理时间分别为20μmol/L,6 h;（2）DCFH-DA流式法与WST-8法结果显示,与H2O2组相比,Pue明显降低MIN6细胞ROS的生成（P＜0.01）,增加T-SOD活性（P＜0.001）;（3）CCK-8法联合流式细胞术,以及TUNEL实验与Hoechst33258联合染色法表明,相较于H2O2组,Pue+H2O2组MIN6细胞活力明显恢复（P＜0.001）,细胞凋亡率显著减少（P＜0.001）;（4）WB法联合免疫荧光技术结果发现,Pue+H2O2组ERS关键分子p-PERK、p-e IF2α、GRP78、ATF4以及CHOP水平明显低于H2O2组（P＜0.001）;凋亡相关分子MCL1、Bcl-2等抗凋亡蛋白表达增加（P＜0.01）,促凋亡Bax水平降低（P＜0.001）;（5）WB法联合免疫荧光技术进一步表明,相较于H2O2组,Pue+H2O2组、AG490+H2O2组以及AG490+Pue+H2O2组中p-JAK2及p-STAT3水平明显减少（P＜0.01）,GR978-PERK-ATF4-CHOP信号轴相关分子水平下调（P＜0.001）,Bcl-2/Bax比率明显增加（P＜0.001）;与Pue+H2O2组相比,CA1+Pue+H2O2组的p-PERK/PERK及p-e IF2α/e IF2α比率增加（P＜0.001）,GRP78、ATF4和CHOP表达上调（P＜0.01）,Bcl-2/Bax比率降低（P＜0.01）;（6）DCFH-DA流式法与WST-8比色法结果显示,与H2O2组相比,AG490+H2O2组以及Pue+H2O2组MIN6细胞ROS的生成明显减少（P＜0.01）,T-SOD活性明显增加（P＜0.001）;而与Pue+H2O2组相比,CA1+Pue+H2O2组ROS生成增加,T-SOD活性降低（P＜0.01）;（7）细胞活力及凋亡检测相关结果提示,与H2O2组相比,AG490+H2O2组以及Pue+H2O2组MIN6细胞活力明显升高（P＜0.01）,凋亡细胞数目明显减少（P＜0.001）;而与Pue+H2O2组相比,CA1+Pue+H2O2组细胞活力明显下降（P＜0.05）,凋亡率明显升高（P＜0.01）。结论:（1）葛根素减轻H2O2诱导的MIN6细胞氧化损伤,抑制MIN6细胞凋亡;（2）葛根素抑制MIN6细胞凋亡与其改善ERS有关;（3）葛根素通过抑制JAK2/STAT3通路改善MIN6细胞ERS。
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