【摘 要】
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目的:构建Neo抗性和EGFP荧光双筛选标志的caveolin-1载体并以此研究caveolin-1在抗细胞焦亡中的作用。方法:1.采用CE design软件设计引物并扩增EGFP和caveolin-1全长基因片段,利用ClonExpress Ⅱ One Step Cloning试剂盒将扩增的EGFP和caveolin-1 DNA片段插入带Neo抗性的pcDNA3.1（+）质粒中构建带Neo 抗性
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目的:构建Neo抗性和EGFP荧光双筛选标志的caveolin-1载体并以此研究caveolin-1在抗细胞焦亡中的作用。方法:1.采用CE design软件设计引物并扩增EGFP和caveolin-1全长基因片段,利用ClonExpress Ⅱ One Step Cloning试剂盒将扩增的EGFP和caveolin-1 DNA片段插入带Neo抗性的pcDNA3.1（+）质粒中构建带Neo 抗性和EGFP荧光双筛选标志的pcDNA3.1-EGFP-caveolin-1 高表达质粒。2.将RAW264.7细胞分为四组,分别为空白对照组,焦亡模型组（100μg/mL ox-LDL孵育48小时）,空白载体组（pcDNA3.1-EGFP质粒转染细胞后与ox-LDL孵育48小时）和caveolin-1高表达组（pcDNA3.1-EGFP-caveolin-1质粒转染细胞后与ox-LDL孵育48小时）。处理结束后检测细胞焦亡情况,Western Blot检测caveolin-1、caspase-1、GSDMD蛋白表达,CCK-8检测RAW264.7细胞死亡率,LDH试剂盒检测细胞培养液LDH水平,ELISA检测细胞培养液中IL-1β、IL-18水平,同时在荧光显微镜下观察caveolin-1在细胞内的分布情况。结果:1.将质粒转化大肠杆菌后取菌液进行PCR鉴定,结果显示pcDNA3.1-EGFP-caveolin-1 质粒载体构建成功;Western Blot 和荧光倒置显微镜观察显示转染了 pcDNA3.1-EGFP-caveolin-1质粒的RAW264.7细胞中caveolin-1蛋白表达量明显增加,表明具有双筛选标志的caveolin-1高表达RAW264.7细胞稳转株构建成功。2.在RAW264.7细胞中高表达caveolin-1后,ox-LDL诱导的巨噬细胞焦亡减少,细胞活力增加,Western Blot结果显示caspase-1、GSDMD蛋白表达降低,生化实验结果显示LDH释放减少,ELISA结果显示IL-1β、IL-18水平降低;荧光倒置显微镜下观察发现ox-LDL刺激后,caveolin-1向细胞膜转位。结论:1.成功构建了 Neo和EGFP双筛选标志的caveolin-1高表达质粒并在RAW264.7细胞中实现了稳定转染;2.高表达caveolin-1可抑制ox-LDL诱导的炎症反应。Caveolin-1在ox-LDL刺激下可向细胞膜转位阻止巨噬细胞焦亡,这可能是caveolin-1的抗炎机制之一。
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慢性粒细胞白血病（CML）是一种恶性的骨髓增殖性疾病,可见于任何年龄,其发病率男性略高于女性。主要表现为未成熟的白细胞异常增多并在骨髓处聚集,随之而来的是抑制骨髓的正常造血功能、导致骨髓衰竭,进一步在全身各处扩散,从而出现严重的血液学症状。若病情未经控制发展到急变期,通常患者会在一年内健康状况迅速恶化导致死亡,因此对CML的及早治疗显得尤为重要。目前已知的有效治疗CML的首选药物为BCR-ABL抑
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目前,化疗药物基因纳米共递送体系面临缺乏肿瘤靶向性、血液循环时间短、细胞摄取差和转染效率低等问题。迫切需要开发安全高效的主动靶向纳米共递送系统。靶向配体能赋予纳米系统良好的肿瘤靶向性,开发基于靶向配体的纳米共递送体系已成为解决问题的重要手段。乳糖酸作为一种主动靶向肝癌细胞的天然特异性配体,被广泛用于构建肝癌靶向的纳米载体,而且作为一种常用的稳定剂,能提高纳米体系的稳定性。因此有望通过探索乳糖酸的接
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近年来,基于纳米医疗技术开发的用于肿瘤治疗或诊断的纳米靶向递送体系取得了巨大进展。纳米靶向递送体系是一类能够定点将药物递送到靶细胞部位,实现精准、高效和安全治疗的纳米材料。目前,研究者构建了多种多样的靶向纳米递送体系,包括脂质体、胶束、聚合物纳米粒、无机纳米粒等,这些靶向纳米递送体系在传递药物用于抗肿瘤研究中展示了巨大的潜力。但大多数纳米靶向递送体系仍面临着靶向效率低、生物相容性差、治疗效果不佳及
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目的:解偶联蛋白UCP5（uncoupling protein 5）位于线粒体内膜,参与质子回流,使氧化磷酸化解偶联。UCP过度激活,ATP生成减少;线粒体膜电位降低,电子传递减少,活性氧（Reactive oxygen species,ROS）水平降低。心脏是一个高耗能组织,本文旨在探讨解偶联蛋白UCP5在果蝇成体心脏中的功能。方法:利用果蝇成体心脏生理学功能分析平台,检测解偶联蛋白UCP5对果
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