【摘 要】
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在所有哺乳动物中,卵母细胞的成熟质量是雌雄动物生殖能力的基础。研究表明,雌二醇（estradiol,E2）及其受体（estrogen nuclear receptors,ERs）在调控小鼠及人的卵母细胞减数分裂进程的过程中起着重要作用。另有研究报道,低浓度雌激素通过ERs促进C型钠尿肽（C-type natriuretic peptide,CNP）对山羊卵母细胞的减数分裂停滞维持作用。环腺苷酸（c
【基金项目】
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国家自然科学基金（No.31760717）；
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在所有哺乳动物中,卵母细胞的成熟质量是雌雄动物生殖能力的基础。研究表明,雌二醇（estradiol,E2）及其受体（estrogen nuclear receptors,ERs）在调控小鼠及人的卵母细胞减数分裂进程的过程中起着重要作用。另有研究报道,低浓度雌激素通过ERs促进C型钠尿肽（C-type natriuretic peptide,CNP）对山羊卵母细胞的减数分裂停滞维持作用。环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate,c AMP）是调控哺乳动物的卵母细胞减数分裂成熟的关键分子。而在哺乳动物的卵母细胞成熟过程中,关于c AMP水平与雌激素核受体表达之间的相关性,尚未见报道。本研究利用免疫组织化学染色技术检测了ERα和ERβ蛋白在绵羊有腔卵泡中表达定位情况,采用酶联免疫吸附技术检测了不同浓度E2处理不同时间（0、1、2h）后绵羊卵丘卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes,COCs）中c AMP水平的变化,随后结合实时定量RT-PCR与免疫印迹技术探讨了添加不同浓度E2对体外培养（1h）绵羊COCs中ERα和ERβ的基因和蛋白表达水平的影响;最后在无其他激素添加的体外培养体系中,单独或者联合添加低浓度E2与c AMP调节剂[毛喉素（For skolin,FSK）、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（Isobutyl-1-methylxanthine,IBMX）与Rp-腺苷3’5’-环一硫代磷酸酯（Rp-adenosine-3’5’-cyclic monophosphorothioate,Rp-c AMP s）],探讨其对绵羊COCs中c AMP与ERβ蛋白表达的可能调控作用。结果显示,（1）雌激素受体ERα和ERβ均表达于绵羊卵丘细胞和卵母细胞;（2）与对照组相比,低浓度E2（0.5 ng/m L）能够明显提升绵羊COCs内c AMP水平（P<0.05）,而高浓度E2（1μg/m L）对其无显著作用（P>0.05）。（3）低浓度E2（0.5 ng/m L）能够明显上调ERβ的基因和蛋白表达,且与对照组相比,均差异显著（P<0.05）,而高浓度E2（1μg/m L）处理组与之无显著差异（P>0.05）。（4）在不含激素的培养体系中添加Forskolin和IBMX,可明显提高绵羊COCs内c AMP水平（P<0.05）。（5）在不含激素的培养体系中单独或者联合添加Forskolin与IBMX以及Rp-c AMPs处理1h后,Forskolin和IBMX处理组能够明显上调ERβ蛋白表达,同时该促进作用可以被Rp-c AMPs抵消（P<0.05）。（6）在不含其他激素的培养体系中,添加低浓度E2（0.5 ng/m L）显著促进ERβ蛋白表达,此作用亦可被Rp-c AMPs抵消（P<0.05）。以上研究结果表明,ERα和ERβ蛋白均表达于绵羊卵丘细胞和卵母细胞。在体外培养的过程中,低浓度E2（0.5 ng/m L）通过促进绵羊COCs内c AMP,随后上调ERβ基因与蛋白表达。本研究结果有助于进一步明确E2在卵母细胞成熟过程中作用,对于提升卵母细胞质量和后续的胚胎发育方面具有重要意义。
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