【摘 要】
：
谷氨酸棒杆菌作为重要的工业生产菌株,常用于食品和药品级氨基酸的生产,具有Ⅰ型脂肪酸合成酶,在脂肪酸合成具有潜力。硫酯酶广泛存在于动植物、微生物体内,能催化水解脂酰CoA和脂酰基-ACP（Acyl carrier protein,ACP）生成辅酶A、脂酰基载体蛋白以及其他含巯基的化合物,同时释放出游离脂肪酸。本文以C.glutamicum ATCC13032的三个具有脂酰CoA硫酯酶活性的基因为研究
论文部分内容阅读
谷氨酸棒杆菌作为重要的工业生产菌株,常用于食品和药品级氨基酸的生产,具有Ⅰ型脂肪酸合成酶,在脂肪酸合成具有潜力。硫酯酶广泛存在于动植物、微生物体内,能催化水解脂酰CoA和脂酰基-ACP（Acyl carrier protein,ACP）生成辅酶A、脂酰基载体蛋白以及其他含巯基的化合物,同时释放出游离脂肪酸。本文以C.glutamicum ATCC13032的三个具有脂酰CoA硫酯酶活性的基因为研究对象,即（Cgl2451,NCgl2365）、（Cg1 1664,NCgl1600）和（Cg10091,NCgl0090）,通过异源和同源表达,鉴定细胞中具有脂酰CoA硫酯酶功能的关键蛋白及其酶学性质,同时研究基因NCgl2365、NCgl1600和NCgl0090对宿主菌体中的脂肪酸代谢的影响。研究结果如下:（1）TE-5（Cgl2451,NCgl2365）对长链脂肪酰基CoA底物活性最高,最适反应温度30℃,最适pH为8.0,Fe2+、Mn2+、Zn2+、Mg2+和K+对酶的活性具有抑制作用,TE-5蛋白酶以C12脂肪酰基CoA为底物时,米氏方程为Y=10.1X+0.00731（R2=0.991）,最大反应速度Vmax为 136.79 μmol/L/min,Km 值为 1.38 mmol/L。TE-6（Cgl1664,NCgl1600）对中链酰基CoA的活性最高,最适反应温度30℃,最适pH为8.0,Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mg2+和K+对酶的活性具有抑制作用,TE-6蛋白酶以C8脂肪酰基CoA为底物时,米氏方程为Y=9.75X+0.00179（R2=0.997）,最大反应速度 Vmax 为 558.6 μmol/L/min,Km 值为 5.45 mmol/L。TE-9（Cgl0091,NCgl0090）对短中链酰基CoA的活性最高,最适反应温度30℃,最适pH为9.0,Mn2+增强酶相对活性,而Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mg2+和K+对活性具有抑制作用,TE-9蛋白酶以C2脂肪酰基CoA为底物时,米氏方程为Y=246X+0.136（R2=0.992）,最大反应速度Vmax为 7.35μmol/L/min,Km值为 1.81 mmol/L。（2）在大肠杆菌BL21中过表达基因NCgl2365、NCgl1600和NCgl0090获得重组菌株BL-5、BL-6和BL-9。在异源表达基因发现:对大肠杆菌中总脂肪酸产量影响程度依次为的是基因NCgl0090,NCgl2365,NCgl1600。与之对应的重组菌株BL-9、BL-5、BL-6总脂肪酸产量分别增加了 58%、38%和 19%。在脂肪酸种类含量变化中,基因NCgl2365、NCgl1600和NCgl0090促使饱和脂肪酸C16:0、C18:0和不饱和脂肪酸C17:1的生成。与对照菌株相比,C16:0和C17:1为重组菌株中的两种主要脂肪酸,C12:0、C16:1、C18:1三种脂肪酸百分含量均有明显降低。（3）在 C.glutamicum ATCC13032 中同源表达基因NCgl2365、NCgl1600和NCgl0090获得重组菌株G-5、G-6和G-9,采用终浓度为1 mM的IPTG诱导重组菌,培养20 h进行脂肪酸分析发现:对总脂肪酸产量影响最大的是基因NCgl0090,其次是基因NCgl1600、NCgl2365,与之对应的重组菌株G-9、G-6、G-5总脂肪酸产量分别提高了 59%、46%和33%。在脂肪酸种类方面,基因NCgl1600和NCgl0090增加脂肪酸种类,NCgl2365对脂肪酸种类影响较少。与对照菌株相比,重组菌株G-5中C17:0脂肪酸占比增加了 80%,其次C16:0脂肪酸占比增加显著,C12:0、C17:1、C18:0、C18:1的占比有所减少。重组菌株G-6中C17:0脂肪酸的占比最多,占比增加了 62%,其次C17:1脂肪酸占比增加一倍,C14:0、C15:0,C18:2和C20:1的占比也有显著的增加,C12:0、C18:0、C18:1的占比有所减少。重组菌株G-9中C16:0在重组菌体内脂肪酸含量最大,其占比增加了 40%,C17:1、C18:0、C18:2、C20:1和C21:0的占比有所增加,其中C17:1占比增加了两倍多;C12:0、C17:0、C18:1这三种脂肪酸占比减少。
其他文献
荒漠植被是干旱区地带性植被,具有独特的功能性状,是荒漠地区重要的植物资源。蒙古韭是荒漠地区特有的典型地带性植物,其在荒漠生态系统中可形成植物斑块。研究蒙古韭的地理空间分布规律和气候变化的响应对荒漠植被恢复与重建、保护生物多样性、维持生态系统稳定的研究提供了重要理论和技术支撑。本研究运用Arc GIS软件和MaxEnt模型分析蒙古韭在巴彦淖尔地区的适宜分布区及对气候变化的响应。通过野外实测和网站调查
乳制品工业生产中噬菌体污染现象是一个急需解决的重要问题,本研究以植物乳杆菌烈性噬菌体P1、P2及其宿主植物乳杆菌IMAU10120为研究对象,采用次级感染法筛选出自发突变的抗噬菌体菌株,以野生株为对照,评价了其吸附特性、吸附受体、发酵特性的变化。通过检测其全基因序列,定位突变位点,解析突变株的抗噬菌体机制。结果表明:1)利用次级感染法成功筛选出一株抗噬菌体P1、P2的突变株,命名为IMAU1012
为研究补饲对放牧犊牛生长、血液指标及瘤胃菌群的影响,本试验以放牧哺乳犊牛为研究对象,围绕“放牧+补饲”的饲养模式,对其体重、体尺、血液生化指标、血液氨基酸水平及瘤胃菌群丰度变化进行分析。旨在提高放牧犊牛的生长发育,为放牧犊牛培育方式提供理论基础。试验一:选取16头日龄、体况相近且健康的放牧哺乳犊牛,随机分为放牧组和放牧加补饲组。所有试验犊牛均随母牛在相同草场放牧,补饲组在放牧的基础上进行了补饲。试
《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中指出要加快建设交通强国。建设交通强国必然要加快建设现代化基础设施体系,高速公路作为其中的一个重要组成部分,其养护工作至关重要。路面使用性能评价及预测为道路养护提供重要依据,因此要做好高速公路的养护工作就要对路面使用性能进行评价与精确地预测。本文依托G55二广高速,首先对G55二广高速（K118-K425路段）道路的数据进行收集,然后,根据收集的道路情况
土壤是植物赖以生存的基础,土壤肥力高低可直接影响植物的生长发育。凋落物是生态系统的重要组成部分,通过分解作用将所积累的营养元素释放到土壤当中,再次被植物吸收,植物根系所吸收的大部分养分（N、P、K矿质元素等）都来源于枯落物。上高台林场地处内蒙古大青山国家级自然保护区东端,作为生物多样性直接受人为干扰最为集中的区域之一,如何通过人为手段促进植被恢复与发展对增加保护区生物多样性具有重要的意义。本文通过
柠条是沙区治理的主要灌丛植物之一,分布广泛,柠条具有平茬复壮的特性,对其进行饲草化开发可缓解当前我国粗饲料供求关系紧张的现状,助力畜牧业节本增效。目前的柠条收获设备中没有能够一次性作业完成柠条平茬、收集平茬后的枝条、输送枝条、对枝条进行截段、对枝条进行揉丝处理集一体的平茬揉丝一体机。平茬揉丝一体机将平茬后的柠条加工成丝状的饲料,适用于牛、羊等反刍动物的饲喂。本文结合前人对柠条收获设备及柠条生物学特
如今生态系统处在不断的变化中,部分地区小气候也不断变化,交通方式、物流方式不断的发展,为媒介生物滋生繁殖、分布、传播疾病提供了便利条件。其中一个突出的特点为一些原有已经消失的虫媒病再度暴发,新的虫媒性疾病不断涌现。由虻、蚊等吸血昆虫传播的如马传染性贫血、伊氏锥虫病、登革热、日本乙型脑炎等虫媒病,近10余年来均明显回升,全球约有25亿人受到威胁。由蜱虫叮咬传播的马梨形虫病（包括泰勒虫、驽巴贝斯虫、马
对荒漠区植物群落的调查和主要土壤类型的理化性质分析,能够在今后的荒漠化防治、植被与土壤资源的保护与合理利用等方面发挥重要的作用。本文以巴彦淖尔市乌拉特荒漠为研究区,分别采用样方法和土壤剖面法对植被和土壤类型开展实地调查,分析了植被类型、不同类型土壤理化性质,以及土壤类型理化性质指标与植物多样性指数之间进行相关性分析,探讨各类型土壤理化性质与植被类型的关系。主要结果如下:（1）研究区内自东南向西北主
以内蒙古河套灌区下游重度盐渍化土壤为研究对象,针对该区域土壤粉粒含量高、物理性质差、入渗速度慢和盐分淋洗困难等问题,在施加脱硫石膏、田间深层开沟和表层掺明沙等多种盐碱地改良措施的基础上,实施暗管排水排盐工程,通过对不同暗管埋设条件下土壤理化性质、水力性质与养分的监测,揭示河套灌区下游重度盐渍化土壤的改良调控机理,提出最佳暗管埋设参数,并通过室内试验得出了适宜掺沙量,为河套灌区的农田排水系统的应用发
沙蒿籽胶作为一种食品改良剂,可有效地改善马铃薯淀粉制品的回生现象,改良口感,本文旨在研究沙蒿籽胶对马铃薯淀粉和羊肉肌原纤维蛋白凝胶的内在相互作用,以及确定合适的沙蒿籽胶添加量。首先探究了沙蒿籽胶的提取工艺优化;然后分别研究了不同添加量的沙蒿籽胶处理对马铃薯淀粉凝胶、羊肉肌原纤维蛋白凝胶及马铃薯淀粉-羊肉肌原纤维蛋白凝胶的影响;并分析沙蒿籽胶对凝胶的热学性能、微观结构、质构特性、凝胶强度、保水性、流