TRIM47基因在非小细胞肺癌中的功能及其机制研究

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:bjiyguang
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目的:在世界范围内,肺癌是发病率和死亡率高居第一位的恶性肿瘤,对人类的身体健康构成了极大的威胁。研究非小细胞肺癌侵袭转移的具体分子机制,阻断其中的一些关键节点,是非小细胞肺癌行之有效的治疗方式,也是当今非小细胞肺癌基础研究的热点。研究表明多种TRIM家族蛋白在非小细胞肺癌发生发展过程中充当了癌基因的角色,促进了肿瘤细胞的增殖和转移。但是TRIM47在非小细胞肺癌中的作用尚不明确。本课题旨在探讨TRIM47在非小细胞肺癌中的表达及其在非小细胞肺癌增殖转移过程中的作用,为非小细胞肺癌治疗提供新的策略和前期实验基础。方法:(1)采用免疫组化和PCR方法检测TRIM47在非小细胞肺癌组织及癌旁组织中的表达情况,分析TRIM47的表达与非小细胞肺癌临床病理因素之间的关系,Log-rank test法分析TRIM47的表达与患者预后之间的关系,Kaplan-Meier绘制生存曲线,Cox风险比例模型法分析临床病理因素对患者预后的影响,ROC曲线分析联合TRIM47和TNM分期预测患者预后的特异性和敏感性。同时挖掘TCGA和GEO数据库,分析TRIM47在非小细胞肺癌中的表达及其与患者预后之间的关系。(2)体外构建TRIM47过表达慢病毒和TRIM47干扰表达慢病毒载体,过表达慢病毒转染SPC-A1细胞,干扰表达慢病毒转染A549、H358和H460细胞。筛选稳定过表达和敲减细胞,CCK-8实验检测TRIM47对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测TRIM47对细胞周期的影响,Transwell小室侵袭及迁移实验检测TRIM47对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响,裸鼠皮下成瘤实验检测TRIM47对非小细胞肺癌细胞体内增殖能力的影响。(3)采用基因富集分析(GSEA)方法对表达谱数据进行分析,寻找TRIM47在非小细胞肺癌发生发展过程中可能参与的信号通路,采用Western blot和qPCR技术检测TRIM47过表达细胞(SPC-A1)和干扰表达细胞(A549、H358、H460)中相关信号通路下游分子的表达,并分析TRIM47调控信号通路关键分子的可能机制。结果:(1)TRIM47在非小细胞肺癌组织中高表达,在癌旁组织中低表达或不表达,TRIM47的表达与肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移密切相关。TRIM47高表达的患者预后较差,COX多因素回归分析发现TRIM47、TNM分期和淋巴结转移是影响患者预后的独立危险因素,ROC曲线提示联合TRIM47和TNM分期可以更好的预测患者的预后。(2)TRIM47过表达细胞株SPC-A1的增殖、侵袭、迁移等能力明显增强,而TRIM47干扰表达细胞株A549、H358和H460的增殖、侵袭、迁移能力明显降低,TRIM47干扰表达后细胞周期被阻滞在G1期,明显减弱了细胞的增殖能力。裸鼠皮下成瘤实验显示TRIM47干扰表达后非小细胞肺癌细胞的体内增殖能力明显降低。(3)基因富集分析发现TRIM47高表达可能通过影响P53-cell cycle、NFκB-EMT等信号通路来促进细胞增殖和转移,Western blot结果显示TRIM47过表达细胞株中细胞增殖、转移相关基因表达明显上调,而干扰表达细胞株中则得到了相反的结果。结论:本课题系统的研究了TRIM47在非小细胞肺癌中的表达及其对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。结果显示TRIM47在非小细胞肺癌组织中的高表达提示预后不良,TRIM47是影响患者预后的独立危险因素之一;TRIM47可能通过泛素化修饰降解P53和IκB,进而参与P53和NFκB的调控,促进非小细胞肺癌的增殖和转移。TRIM47有可能成为非小细胞肺癌治疗的新靶点。
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