本文将化学发光传感技术、纳米技术相结合,探索构建了高灵敏度化学发光免疫传感器的新方法。基于化学发光、光谱学、电化学等手段对构筑的免疫传感器性能进行研究及优化。金纳米粒子作为固相载体,增加酶标抗体（或抗体）在固体表面的固定量,利用新型化学发光增强剂放大化学发光信号,提高化学发光免疫传感器的灵敏度。结果表明,所建立的检测方法灵敏度高,易制作、简便,在生物分析中将具有广阔的应用前景。本文主要开展了以下几个方面的工作:一、Luminol-H₂O₂-HRP-4-（1, 2, 4-三氮唑-1-基）苯酚增强化学发光新体系的研究及其应用研究了一种新型酚类衍生物4-（1,2,4-三氮唑-1-基）苯酚（TRP）对Luminol-H₂O₂-HRP化学发光体系的增强作用。结果表明TRP可以作为化学发光体系Luminol-H₂O₂-HRP的增强剂。建立了一种增强化学发光新体系Luminol-H₂O₂-HRP-TRP,并对新体系的各项影响因素进行了优化。在最佳实验条件下,对游离HRP进行了测定,测定游离HRP的线性范围为8.0×10^-10 g/mL 5.0×10^-8 g/mL,检测限为5.0×10^-10 g/mL。与经典增强剂对碘苯酚（PIP）相比,TRP增强的化学发光强度相对要高,发光时间更长。对Luminol-H₂O₂-HRP-TRP增强化学发光体系的机理进行了讨论。利用Luminol-H₂O₂-HRP-TRP增强化学发光体系并结合磁性微球技术对H₂O₂进行了测定。研究表明,磁性微球作为固相载体固定HRP时,本体系对H₂O₂测定的线性范围为2.0×10^-6 mol/L 1.0×10^-3mol/L,检测限为2.0×10^-6 mol/L。二、Luminol-H₂O₂-HRP-p-[1,2,4]-三氮唑基苯酚磷酸单酯预增强化学发光新体系的研究利用三氯氧磷法制备了p-[1,2,4]-三氮唑基苯酚磷酸单酯（TAPM）。在碱性磷酸酯酶（ALP）催化水解下,TAPM对Luminol-H₂O₂-HRP化学发光体系具有明显的预增强作用。考察了这一预增强发光体系中,影响发光强度的各种因素。建立了Luminol-H₂O₂-HRP-TAPM-ALP发光体系测定ALP的化学发光新方法。该方法测定ALP的检出限可达1.0μg/L（S/N=3）,ALP浓度在1.0μg/L 100μg/L范围内与化学发光强度呈良好的线性相应关系。三、Luminol-H₂O₂-HRP-4-羟基-4′-碘-联苯（IPP）增强化学发光新体系的研究及其应用研究了一种对位具有活性取代基的酚类化合物4-羟基-4′-碘-联苯（IPP）对Luminol-H₂O₂-HRP化学发光体系的增强作用。建立了新型增强化学发光体系Luminol-H₂O₂-HRP-IPP,并对体系的各影响因素进行了优化,确定了反应的最佳条件。在最佳实验条件下,对游离HRP进行了测定,测定游离HRP的线性范围为5.0×10^-11 g/mL 4.0×10^-8 g/mL,检测限为9.0×10^-12 g/mL。研究表明IPP的增强效果优于经典增强剂对碘苯酚（PIP）。对Luminol-H₂O₂-HRP-IPP增强化学发光体系的机理进行了讨论。并利用Luminol-H₂O₂-HRP-IPP增强化学发光酶联免疫分析新体系,采用双抗体夹心法,结合免疫磁性微球分离和化学发光分析技术建立了血清中AFP含量的测定方法。该方法操作简单、快速,对AFP测定的线性范围为0.5 ng/mL 5.0 ng/mL,检测限为0.5 ng/mL,比酶联免疫吸附测定光度法（ELSA）低。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定,并与ELISA法进行了对照,二者相关性良好。四、Luminol-H₂O₂-HRP-溴酚兰增强新化学发光体系的研究及其应用研究了一种新型化学发光增强剂溴酚兰（BPB）对Luminol-H₂O₂-HRP化学发光反应的增强作用。建立了新型增强化学发光体系Luminol-H₂O₂-HRP-BPB,并对体系的各影响因素进行了优化,确定了反应的最佳条件。在最佳实验条件下,对游离HRP进行了测定,测定游离HRP的线性范围为5.0×10^-11 g/mL 1.0×10^-9 g/mL,检测限为1.0×10^-11 g/mL。对Luminol-H₂O₂-HRP-BPB增强化学发光体系的机理进行了讨论。利用Luminol-H₂O₂-HRP-BPB增强化学发光酶联免疫分析新体系,采用双抗体夹心法,结合免疫磁性微球分离和化学发光分析技术建立了血清中AFP含量的测定方法。该方法操作简单、快速,对AFP测定的线性范围为1.0 ng/mL 50.0 ng/mL,检测限为0.2 ng/mL。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定,并与ELISA法进行了对照,二者相关性良好。五、基于金纳米粒子作固相载体的增强化学发光免疫传感器的研制研究了以金纳米粒子作为酶标抗体的固相载体,利用静电吸附作用将HRP标记AFP抗体固定在其表面,结合磁性微球的高效分离技术,采用双抗体夹心法,建立了Luminol-H₂O₂-HRP-BPB测定AFP、Luminol-H₂O₂-HRP-IPP测定AFP的新型化学发光免疫传感器。二者对AFP测定的线性范围分别为0.1 ng/mL 5.0 ng/mL,0.008 ng/mL 0.3 ng/mL,检测限分别为0.01 ng/mL,5.0 pg/mL。以金纳米粒子作为固相载体,利用共价结合作用将发光底物鲁米诺和CEA抗体同时固定在其表面,结合磁性分离技术,采用双抗体夹心法,建立了一种新型的、简便的化学发光标记技术,研究了一种新型的Luminol-H₂O₂-HRP-IPP增强化学发光体系测定CEA的化学发光免疫传感器。对CEA测定的线性范围为0.5 ng/mL 50.0 ng/mL,检测限为0.5 ng/mL。用所建立的方法对病人血清样品进行了测定,并与ELISA法进行了对照,二者相关性良好。