论文部分内容阅读
目的:本实验通过建立小鼠肝脏全肝阻断缺血再灌注损伤(IRI)模型,检测微管蛋白折叠辅助因子B(TBCB)在小鼠肝脏缺血再灌注后不同时间点的表达,探讨TBCB在小鼠全肝缺血再灌注损伤中的作用及其关系。方法:1、采用小鼠全肝阻断缺血再灌注损伤模型,我们选取的健康C57小鼠60只被随机分为对照组7只、缺血再灌注组42只;缺血再灌注组,每组通过夹闭小鼠肝门,缺血30分钟,再按不同灌注时限(2、4、6、8、12、24h)分为6个亚组,每个亚组7只,构建小鼠全肝阻断缺血再灌注损伤模型;分别于实验结束后留取小鼠血液及肝脏组织。2、首先选用全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST水平,了解肝功能的表达情况,用ELISA检测血清中IL-6、TNF-α表达水平。3、应用HE染色观察肝脏的形态学改变。以及采用Western Blot和免疫组织化学的方法,检测缺血再灌注各个时间点肝组织中TBCB蛋白、IL-6、TNF-α的表达变化。4、Real-Time PCR检测对照组及缺血再灌注组,各个时间点小鼠肝脏组织TBCB因子的mRNA表达和变化。结果:1、全自动生化分析仪检测血清中ALT、AST样本中,以及ELISA检测血清中IL-6、TNF-α表达水平,与对照组比较,缺血再灌注组中的AST、ALT、IL-6、TNF-α表达水平明显高于对照组,且在再灌注的各个时间点中,12 h最高;与对照组比较,具有统计学意义(P<0.05)。2、HE染色观察肝脏的形态学改变上,在我们发现缺血再灌注组与对照组比较,肝脏形态学明显改变,尤其在缺血再灌注后12 h,肝细胞变性、坏死明显,肝索结构消失,部分肝细胞灶状坏死。3、IHC检测对照组及缺血再灌注组的TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表达水平情况,结果显示:缺血再灌注组TBCB、IL-6、TNF-α蛋白表达水平明显高于对应的对照组,且缺血再灌注组各个时间点的表达存在差异性,TBCB、IL-6、TNF-α蛋白的表达在12 h达到高峰。4、Real-Time PCR和Western Blot检测结果显示:TBCB基因及TBCB蛋白表达水平明显高于对应的对照组,并且在缺血再灌注组各个时间点中,12h变化最明显。5、相关性分析结果显示:在小鼠肝脏缺血再灌注中TBCB蛋白水平的表达与TNF-α,IL-6蛋白水平与呈一定的关联性(P<0.05)。结论:1、通过实验可以看出,在基因水平和蛋白水平,在缺血再灌注损伤中肝脏组织TBCB表达水平显著高于假手术组,具有相同的趋势,表明TBCB可能是参与肝脏缺血再灌注损伤的一个靶点,并发挥重要作用。2、我们的研究显示TBCB在缺血再灌注损伤中表达水平,与IL-6、TNF-α在小鼠肝脏缺血再灌注表达,呈一定的关联性,TBCB与IL-6、TNF-α共同在肝脏缺血再灌注中肝脏的损伤的发生中起到关键作用。