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背景:肝细胞癌（HCC）严重威胁人类生命健康,肿瘤细胞的侵袭转移是导致HCC不断恶化及预后较差的关键要素。进一步深入研究HCC发生、发展的潜在生物标志物并确定其有效治疗靶点,对预防肝细胞癌转移复发至关重要。CYP3A5是CYP3A亚家族中最重要的肝外分布形式,参与了大量内源性激素、外源性药物及潜在毒性化合物的代谢。有研究表明,CYP3A5在多种癌症如肝癌、肺癌、胃癌、前列腺癌和肾癌中表达失调,CYP3A5在转录水平和蛋白水平的低表达会导致肝癌患者较差的总体生存率和肝癌的侵袭转移。miRNA是调控肿瘤侵袭转移的关键分子,在多种肿瘤细胞中存在差异表达,也有研究证实microRNA可与CYP450代谢酶发生结合进而影响其调控。据此我们推测,miRNA有可能通过调控CYP3A5的表达进而影响肿瘤细胞的侵袭转移。目的:通过HepG2人肝癌细胞模型,采用瞬时共转染、双荧光素酶报告基因、Western-bloting、RT-q PCR、CCK-8和细胞划痕等实验技术,系统研究miR-183/148a对HepG2细胞中CYP3A5表达及其侵袭转移功能的影响,深入探索并揭示micRNA调控HCC肿瘤细胞侵袭转移的分子学机制,为HCC的临床防治探寻新的作用靶点与治疗策略。方法:1、应用生物信息学软件预测可能与CYP3A5和PXR mRNA 3’-UTR靶向结合的miRNAs。2、通过瞬时转染miR-183、miR-148a模拟物（mimic）或抑制剂（inhibitor）来构建miR-148/miR-183过表达或抑制表达的HepG2细胞模型。3、应用RT-q PCR、Western blotting方法来检测HepG2细胞中PXR和CYP3A5 mRNA及蛋白水平,研究miR-183、miR-148a对HepG2细胞中CYP3A5、PXR表达水平的影响。4、构建CYP3A5 mRNA 3’-UTR野生型报告质粒（p GL/CYP3A5-WT）和miR-183/148a结合位点突变的突变型质粒（p GL/CYP3A5-Mut）,通过双荧光素酶报告基因方法,探明靶向结合的确切位点。5、通过CCK-8实验及划痕实验来检测HepG2细胞的细胞活性及其迁移能力,研究miR-183、miR-148对HepG2细胞表征功能的影响。6、使用Western blotting方法来检测HepG2细胞中AKT、m TORC2相关蛋白的表达,研究miR-miR-183、miR-148a对HepG2细胞中PI3K/AKT信号通路、m TORC2信号通路的影响。结果:1、所选取的生物信息学数据库检索到miR-183与CYP3A5 mRNA 3’-UTR、miR-148a与PXR mRNA 3’-UTR互补配对结合,特异性高、保守性好且二级结构稳定。2、瞬时转染miR-183、miR-148a mimic后,各组中miRNA与mimic NC组相比表达水平明显上调,上调的倍数分别是989.02倍和1101.72倍。反之,通过瞬时转染miR-183、miR-148a inhibitor后,各组中miRNA与inhibitor NC组相比表达水平明显下调,下调的倍数分别是2.78倍和3.13倍,差异均有统计学意义（P＜0.05）。以上实验结果表明过表达或抑制表达miR-183/148a的HepG2细胞模型构建成功。3、瞬时转染miR-183 mimic至HepG2细胞48 h后,CYP3A5 mRNA表达水平下调2.33倍,CYP3A5蛋白表达水平也下调1.54倍,差异有统计学意义（P＜0.05）。瞬时转染miR-183 inhibitor至HepG2细胞48 h后,CYP3A5mRNA表达水平上调1.54倍,CYP3A5蛋白表达水平上调1.53倍,差异有统计学意义（P＜0.05）。瞬时转染miR-148a mimic至HepG2细胞48 h后,PXR mRNA表达水平下调1.37倍,PXR蛋白表达水平下调1.19倍,差异有统计学意义（P＜0.05）。而瞬时转染miR-148a inhibitor至HepG2细胞48 h后,PXR mRNA表达水平上调1.19倍,,PXR蛋白表达水平上调1.40倍,差异有统计学意义（P＜0.05）。但转染miR-148a mimic及inhibitor后,CYP3A5的表达无明显改变。4、双荧光素酶报告基因实验显示,miR-183 mimic可对p MIR/CYP3A5-WT报告基因荧光素酶的活性产生显著抑制作用,相较于对照组下降40%（P＜0.05）。miR-183 inhibitor可对p MIR/CYP3A5-WT报告基因荧光素酶的活性产生明显诱导作用,相较于对照组上升25%（P＜0.05）。反之,在CYP3A5mRNA 3’-UTR和miR-183结合位点突变的报告基因实验中,miR-183 mimic和miR-183 inhibitor对荧光素酶活性不会产生影响,其活性分别为1.031±0.041、1.0520±0.032,差异无统计学意义（P＞0.05）。miR-148a mimic和miR-148a inhibitor对报告基因荧光素酶活性均无影响,在CYP3A5 mRNA 3’-UTR结合位点突变的系统中,过表达miR-148a和抑制表达miR-148a对报告基因荧光素酶活性亦无影响。5、CCK-8实验结果表明,转染miR-183 mimic的HepG2细胞增殖活性上升,与对照组相比上升38.23%;转染miR-183 inhibitor的HepG2细胞增殖活性下降,与对照组相比下降22.63%。差异有统计学意义（P＜0.05）。转染miR-148a mimic的HepG2细胞增殖活性下降,与对照组相比下降12.58%（P＜0.05）;转染miR-148a inhibitor的HepG2细胞增殖活性上升,与对照组相比上升34.88%;（P＜0.05）。6、划痕实验结果表明,转染miR-183 mimic 48 h及72 h后HepG2细胞迁移能力分别增加12.56%、18.78%（P＜0.05）;而转染miR-183 inhibitor 48 h及72 h后HepG2细胞迁移能力分别降低15.23%、13.90%（P＜0.05）。而在转染miR-148a mimic 48 h及72 h后HepG2细胞迁移能力分别降低8.72%、8.75%;转染miR-148a inhibitor 48 h及72 h后HepG2细胞迁移能力分别增加12.65%、15.69%,差异有统计学意义（P＜0.05）。7、转染miR-183 mimic后,与对照组相比,实验组AKT总蛋白水平差距不大,但是磷酸化AKT蛋白表达相对更高。而在转染miR-183 inhibitor后,与对照组相比,实验组AKT总蛋白水平同样相差不大,但是磷酸化AKT蛋白的表达相对更低,差异有统计学意义（P＜0.05）8、转染miR-183 mimic后,与对照组相比,实验组m TORC2（m TOR和RICTOR）蛋白表达相对更高。而在转染miR-183 inhibitor后,与对照组相比,实验组m TORC2（m TOR和RICTOR）蛋白的表达相对更低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1、miR-183可与CYP3A5 mRNA 3’-UTR靶向结合,通过转录后调控,下调CYP3A5表达。2、miR-183可促进HepG2细胞的增殖活性及其迁移能力,该促进作用可能与其抑制CYP3A5表达进而促进AKT磷酸化/m TORC2通路相关。3、miR-148a可靶向结合PXR mRNA 3’-UTR并下调PXR表达,但对CYP3A5表达无明显影响。4、miR-148a的高表达可抑制HepG2细胞的增殖活性及其迁移能力。