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目的:肿瘤细胞裂解物(Tumor Associated Antigen,TAA)冲击致敏同系大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cells,IDC),分析TAA/DC的生物学特性及在大鼠体内抗肿瘤免疫治疗的效果。
方法:①将近交系Fischer344大鼠骨髓细胞进行密度梯度离心,分离出单个核细胞(Mononuclear Cells,MNCs),培养后获得单核细胞(Monocytes,Mo),用含重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重组白细胞介素-4(rrlL4)和重组肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)的培养体系诱导扩增DC。②将大鼠卵巢上皮低分化腺癌细胞株NuTu-19进行传代培养,在对数生长期进行反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物(TAA)。③用TAA对未成熟DC进行冲击,获得TAA致敏的DC,即TAA/DC。④定期用流式细胞仪对DC、TAA/DC进行细胞免疫表型分析。⑤将对数生长期的NuTu-19细胞,接种于雌性大鼠右腋皮下,建立卵巢癌动物模型。⑥用磷酸缓冲液(Phosphate Balanced Solution,PBS)、DC、TAA/DC分别对已荷瘤两周的大鼠进行免疫治疗,观察局部肿瘤生长、转移、腹水情况,全身免疫状况的改变及生存期。
结果:①近交系Fischer344大鼠骨髓来源的Mo在三种相关细胞因子的作用下,可以诱导分化、并逐渐发育为成熟的DC,其细胞免疫表型及功能不断发生变化。②TAA可促进骨髓来源的前体细胞分化为成熟的DC,并高表达CD86、MHC-II、OX62,与未致敏DC相比,差异明显:但TAA/DC的形态与DC无明显差别。③与DC、PBS相比,TAA/DC可改善大鼠一般情况,局部肿瘤细胞增生受到显著抑制,无转移。④TAA/DC可明显提高荷瘤大鼠的全身免疫状况,与其它两组相比,在细胞免疫中起主要作用的CD8+T细胞在治疗前及治疗后三周差异具有显著性(P<0.01);而CD3+细胞差异不明显。在处死大鼠前,CD8+T细胞又出现明显下降,差异显著(P<0.01),说明TAA/DC对荷瘤大鼠单次免疫治疗,只能在一段时间内改善其细胞免疫功能,随后仍出现衰退,间隔一定时间的多次免疫治疗有可能长时间的改善细胞免疫功能。
结论:①近交系Fischer344大鼠骨髓来源的Mo可在体外培养分化扩增为成熟的功能性的DC。②TAA/DC负载肿瘤细胞的全抗原,细胞形态无改变,但高表达主要组织相容性复合物MHC-II、共刺激分子及黏附分子,抗原提呈功能显著增强,可提呈肿瘤抗原,诱导抗肿瘤免疫反应。③TAA/DC可使肿瘤局部异常细胞增生受到抑制,转移率降低。④TAA/DC可明显改善细胞免疫状态,使CD8+T细胞数量显著增高,但随后又出现下降,单次免疫治疗,效果维持短暂。