肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞对大鼠卵巢上皮癌免疫治疗的体内研究

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目的:肿瘤细胞裂解物(Tumor Associated Antigen,TAA)冲击致敏同系大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(Immature Dendritic Cells,IDC),分析TAA/DC的生物学特性及在大鼠体内抗肿瘤免疫治疗的效果。   方法:①将近交系Fischer344大鼠骨髓细胞进行密度梯度离心,分离出单个核细胞(Mononuclear Cells,MNCs),培养后获得单核细胞(Monocytes,Mo),用含重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重组白细胞介素-4(rrlL4)和重组肿瘤坏死因子-α(rrTNF-α)的培养体系诱导扩增DC。②将大鼠卵巢上皮低分化腺癌细胞株NuTu-19进行传代培养,在对数生长期进行反复冻融,获得肿瘤细胞裂解物(TAA)。③用TAA对未成熟DC进行冲击,获得TAA致敏的DC,即TAA/DC。④定期用流式细胞仪对DC、TAA/DC进行细胞免疫表型分析。⑤将对数生长期的NuTu-19细胞,接种于雌性大鼠右腋皮下,建立卵巢癌动物模型。⑥用磷酸缓冲液(Phosphate Balanced Solution,PBS)、DC、TAA/DC分别对已荷瘤两周的大鼠进行免疫治疗,观察局部肿瘤生长、转移、腹水情况,全身免疫状况的改变及生存期。   结果:①近交系Fischer344大鼠骨髓来源的Mo在三种相关细胞因子的作用下,可以诱导分化、并逐渐发育为成熟的DC,其细胞免疫表型及功能不断发生变化。②TAA可促进骨髓来源的前体细胞分化为成熟的DC,并高表达CD86、MHC-II、OX62,与未致敏DC相比,差异明显:但TAA/DC的形态与DC无明显差别。③与DC、PBS相比,TAA/DC可改善大鼠一般情况,局部肿瘤细胞增生受到显著抑制,无转移。④TAA/DC可明显提高荷瘤大鼠的全身免疫状况,与其它两组相比,在细胞免疫中起主要作用的CD8+T细胞在治疗前及治疗后三周差异具有显著性(P<0.01);而CD3+细胞差异不明显。在处死大鼠前,CD8+T细胞又出现明显下降,差异显著(P<0.01),说明TAA/DC对荷瘤大鼠单次免疫治疗,只能在一段时间内改善其细胞免疫功能,随后仍出现衰退,间隔一定时间的多次免疫治疗有可能长时间的改善细胞免疫功能。   结论:①近交系Fischer344大鼠骨髓来源的Mo可在体外培养分化扩增为成熟的功能性的DC。②TAA/DC负载肿瘤细胞的全抗原,细胞形态无改变,但高表达主要组织相容性复合物MHC-II、共刺激分子及黏附分子,抗原提呈功能显著增强,可提呈肿瘤抗原,诱导抗肿瘤免疫反应。③TAA/DC可使肿瘤局部异常细胞增生受到抑制,转移率降低。④TAA/DC可明显改善细胞免疫状态,使CD8+T细胞数量显著增高,但随后又出现下降,单次免疫治疗,效果维持短暂。
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