论文部分内容阅读
研究背景：甲状腺乳头状癌为甲状腺恶性肿瘤最常见的一种类型,约占全部甲状腺癌的80%。分化型甲状腺癌,包括甲状腺乳头状癌恶性程度低,治愈率高,预后较好。与肿瘤预后相关的临床病理特征包括：老龄,男性,肿瘤直径较大,肿瘤腺外侵润,淋巴结转移,远处转移,肿瘤分级高。尽管甲状腺乳头状癌患者接受手术治疗及放射性碘131治疗后可获得较好的效果,但仍面临一定的复发率。同时对不适合手术治疗及对碘131耐药的患者,目前尚无理想治疗方案。对甲状腺乳头状癌患者进行预后风险评估是术后管理的重要手段,这将有利于降低复发率,提高总生存率。细胞骨架IQGAP1分子量为189-kDa,包含多个重要的蛋白结构域,参与多个细胞过程中相关的分子相互作用参与调整这些细胞过程,从而影响细胞功能。越来越多的证据表明IQGAP1为原癌基因。如肝癌,乳腺癌,结肠癌,肺癌,胃癌,黑色素瘤中均检测到IQGAP1高表达。目前已有研究证实IQGAP1在甲状腺乳头状癌中高表达,但其在甲状腺乳头状癌转移灶中的表达情况及其对甲状腺乳头状癌侵袭转移的作用尚不清楚。利用IQGAP1可能早期诊断PTC恶性程度,用于预后判断,同时也可能为PTC设计靶向药物治疗位点提供依据。研究IQGAP1在PTC及转移灶,正常甲状腺组织中的表达情况。判断IQGAP1与PTC进展的关系。通过RNA interference (RNAi)技术沉默PTC细胞株IQGAP1表达后,研究其对PTC细胞生长增殖,侵袭转移的影响。方法：(1)收集湘雅医院2013年3月至7月行甲状腺手术患者的新鲜组织标本。这些组织标本分为有淋巴结转移组,无淋巴结转移组,正常甲状腺组织。新鲜组织标本使用PCR. Western blotting免疫组化检测IQGAP1mRNA及蛋白表达情况。(2)培养PTC细胞株K1, TPC-1, BCPAP及正常甲状腺细胞株Nthy-ori3-1。PCR、Western blotting筛选IQGAP1高表达细胞株用于基因沉默实验。(3)构建IQGAP1-siRNA沉默IQGAP1,免疫荧光技术判断转染效率。Western blotting检测沉默效果。(4)沉默IQGAP1表达后,MTT法用于绘制生长曲线,流式细胞仪分析肿瘤细胞增殖,凋亡情况,平板克隆形成实验分析细胞增殖。Transwell实验,划痕实验用于判断肿瘤细胞侵袭转移能力。结果：(1) IQGAP1在肿瘤中表达明显增高,癌组织IQGAP1明显高于癌旁组织及正常甲状腺组织,差别有统计学意义(p<0.05)。一二组甲状腺癌组织间比较,IQGAP1表达无明显差异。转移淋巴结具有最高IQGAP1表达量,均高于一二组中癌组织(P<0.05),癌旁组织及正常甲状腺组织中表达差别无统计学意义。IQGAP1阳性颗粒主要在细胞质中出现。(2)siIQ2在浓度为2μmol/1时沉默K1和TPC-1细胞IQGAP1效率最高。IQGAP1蛋白表达量均减少超过70%,沉默效果佳。(3)沉默IQGAP1抑制肿瘤细胞生长。沉默K1和TPC-1细胞IQGAP1蛋白表达后,连96h发现细胞增殖能力明显受到抑制,处于静置期细胞增多,分裂期细胞减少,细胞增殖指数降低,细胞凋亡增多。(4) IQGAP1有促进乳头状癌细胞侵袭转移的能力。IQGAP1沉默后肿瘤细胞迁移过matrigel的能力减弱,在划痕内迁移的能力减弱。结论：(1)甲状腺乳头状癌中IQGAP1在mRNA和蛋白表达水平明显升高,尤其在淋巴结转移灶中升高更为明显。IQGAP1可能参与甲状腺癌的肿瘤形成,侵袭转移过程。(2)下调IQGAP1表达可以明显抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖能力、促进凋亡和抑制细胞迁徙转移能力,提示IQGAP1可作为治疗甲状腺乳头状癌的潜在靶基因。