非分型流感嗜血杆菌培养条件的优化及Haps蛋白的分离纯化

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目的 观察非分型流感嗜血杆菌ATCC49247的生长条件中的因子需求情况,优化非分型流感嗜血杆Haps蛋白质片段表达与分泌条件,并用弱阳离子交换层析柱纯化Haps蛋白质片段,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,为进一步研究打下基础。 方法 1.将非分型流感嗜血杆菌ATCC49247均匀涂布于LB平板培养基上,并在涂菌后的LB平板培养基上放置三张无菌滤纸,在滤纸上分别滴入20μl的氯化血红素液体、β-NAD液体及含有氯化血红素和β-NAD的混合液体,然后将平板置37℃孵箱孵育。 2.用心脑浸液液体培养基(sBHI)培养非分型流感嗜血杆菌ATCC49247,观察在不同培养时间段,非分型流感嗜血杆菌培养液在600nm波长的光吸收值(A600)变化,并用SDS-PAGE电泳检测Haps蛋白质片段分泌量的变化。 3.非分型流感嗜血杆菌ATCC49247在心脑浸液液体培养基(sBHI)中37℃培养18小时后,加入IPTG诱导不同时间,观察其对Haps蛋白质片段分泌量的影响。
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