梅花成熟胚子叶再生体系的优化及PmMYBs基因转化研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Tiny_Drunk
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梅花(Prunus mume Sieb.et Zucc.)属于蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus)的落叶小乔木,在园林应用中具有十分重要的观赏价值。梅花喜温暖湿润的气候条件,在我国华北以及东北、西北的大部分地区很难安全露地越冬。通过遗传转化的方法能够快速获得符合人们意愿的新种质,而遗传转化的前提条件是完善再生体系。本研究主要以’雪梅’和’粉皮宫粉’杂交获得的梅花成熟胚子叶为材料,探索适合成熟胚子叶再生的最适基本培养基、激素组合、激素浓度以及培养条件,在前人研究的基础上进一步提高梅花子叶再生率;同时以梅花未成熟胚子叶和成熟胚子叶为受体,将PmMYBs基因转入梅花,获得了梅花转化植株。主要的研究成果如下:(1)成熟胚子叶再生体系的优化根据前人对李属植物子叶再生的研究状况,探索诱导梅花成熟胚子叶再生的最适培养基。经过比较激素TDZ、BA和IBA以及它们之间的交互作用,筛选出适合梅花成熟胚子叶再生的培养激素种类以及浓度组合,结果表明:以1/2 MS为基本培养基,在添加0.5 mg/L的BA、1.0 mg/L的TDZ和1.0 mg/L的IBA的培养基上可诱导子叶再生,添加500mg/L的水解酪蛋白有助于提高子叶的再生率,最高再生率可达到38.02%;暗处理影响子叶的再生率及生长状况,黑暗条件下培养12d后放到光照条件下,子叶的再生率达到最高,而且再生苗后期的生长状况最佳;再生芽转移到相同培养基的广口瓶中能够正常增殖并伸长,待再生苗长到3cm左右,转移到1/2 MS+BA 3.0 mg/L培养基中培养,诱导茎基部产生愈伤组织,再将产生了愈伤组织的植株放入灭过菌的200 mg/L IBA液体中浸泡20s,接种于不加任何激素的QL培养基中继续培养,45d左右可生根。(2)以未成熟胚子叶和成熟胚子叶为受体的遗传转化将未成熟胚子叶接种于 1/2 MS+BA2.0 mg/L+TDZ 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L 培养基中,成熟胚子叶接种于 1/2 MS+BA0.5 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L+CH 500 mg/L培养基中,黑暗条件下预培养3d,侵染15min,放到上述附加100 μmol/LAS的共培养基中黑暗条件下培养3d,以Km20mg/L及Cef300mg/L为筛选压,未成熟胚子叶和成熟胚子叶延迟筛选时间分别为7d、10d。在上述遗传转化技术参数下培养,以梅花未成熟胚子叶为受体进行根癌农杆菌介导转化获得15株生长正常的抗性植株,PCR检测10株呈阳性,以梅花成熟胚子叶为受体共得到抗性苗25株,经PCR检测呈阳性的为15株。
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