玉米TIFY家族ZmJAZ14基因的功能验证

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20世纪60年代茉莉素被人们发现,作为一种重要的植物内源激素人们对其了解逐渐深入。茉莉素(JAs)是次生代谢产物,它在维持植物体发育、生长、抗逆等生物进程中起着至关重要的作用。在模式植物拟南芥中,JAs影响雄蕊和绒毛发育、营养生长、细胞周期调控、衰老,除此之外还影响植物体对外界生物及非生物胁迫的响应。TIFY家族从ZIM家族中分离出来,由JAZs、ZIM和PPD三大类成员组成。JAZs(JASMONATE ZIM-DOMAIN protein)作为茉莉酸信号通路的重要调控蛋白起到开关的作用,从而调控茉莉酸信号通路。除此以外,JAZs还可以结合其它代谢通路中的调节因子,从而使茉莉酸代谢通路与其它代谢通路相互协同,互相调节,从而在植物体的发育、生长、抗逆等生物进程中起到至关重要的作用。近两年对作物TIFY家族的研究突飞猛进,目前已经有相关报道的粮食作物与经济作物有:水稻、大豆、葡萄和烟草,但是在上述几个作物中过表达TIFY成员的作用却不尽相同,在水稻中可以增加籽粒大小;在葡萄与大豆中可以增加植株对盐碱的敏感性;在烟草中可以促进尼古丁的合成。但是,到目前为止还没有玉米TIFY家族成员功能的报道,也没有任何玉米JAZ蛋白功能的相关报道。本研究对玉米转录因子TIFY家族进行预测,找出玉米特异的TIFY转录因子,结合芯片数据进行分析,确定并克隆得到了玉米胚乳特异表达的JAZs基因ZmJAZ4和ZmJAZ14。对ZmJAZ4和ZmJAZ14进行了功能鉴定:通过蛋白亚细胞定位等实验证明ZmJAZ4和ZmJAZ14具有细胞核定位性质,符合JAZs蛋白特点;通过激素与胁迫处理证明ZmJAZ4和ZmJAZ14具有响应激素与胁迫的能力,为诠释蛋白功能提供了线索。本研究通过沾花法获得ZmJAZ14基因过表达拟南芥,经转基因植株表型鉴定,ZmJAZ14过表达拟南芥植株具有以下特性:过表达拟南芥对NAA敏感,侧根数目增多;过表达拟南芥可以抵抗MeJA和SA引起的根伸长抑制;过表达拟南芥对干旱耐受以及对碱性环境敏感。本研究在得到相应拟南芥过表达转化体表型后,对ZmJAZ4和ZmJAZ14蛋白的互作蛋白进行了调查,以期更充分的解释引起相应表型的原因。本研究构建了玉米胚乳cDNA文库,利用酵母双杂交系统,对ZmJAZ4和ZmJAZ14蛋白在玉米籽粒中的互作蛋白进行了筛选,并得到候选基因,下一步将对得到的候选基因进行验证,以便为解释ZmJAZ4和ZmJAZ14基因的功能提供直接的分子证据。
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