犬巴贝斯虫病是一种临床危害性大、地理分布广泛的犬血液原虫病。犬感染巴贝斯虫后,临床症状表现为发热、粘膜苍白、厌食、贫血、黄疸、淋巴结病和脾肿大,急性感染可导致犬只死亡。在我国,犬巴贝斯虫病日渐流行,严重危害伴侣动物的身体健康。目前诊断犬巴贝斯虫病主要依靠显微镜检查和PCR方法,并且没有疫苗预防该病。近几年随着技术的进步,犬巴贝斯虫虫体重要抗原分子逐渐被克隆和测序,这些抗原分子在的重组表达在免疫学检测方面发挥了重要作用,同时为犬吉氏巴贝斯虫疫苗的研制奠定了良好的基础。本研究表达了重组犬吉氏巴贝斯虫Hsp70、TRAP、P12蛋白,采用纯化的Hsp70、TRAP、P12重组蛋白抗原进行了血清抗体间接ELISA条件的优化,最终筛选出重组蛋白TRAP为犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体检测的重组抗原,建立了犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体间接ELISA检测方法。本研究主要包括以下两部分内容:1、犬吉氏巴贝斯虫Hsp70、TRAP、P12基因克隆与原核表达本研究从疑似感染犬巴贝斯虫的病犬血液中检测出犬吉氏巴贝斯虫,提取病犬血液中总RNA,反转录成cDNA,对Hsp70、TRAP、P12基因进行PCR扩增,通过双酶切、连接到原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒,并转化BL21（DE3）感受态细胞中,经IPTG诱导表达蛋白。结果显示重组蛋白Hsp70、TRAP均以可溶性蛋白表达,重组蛋白P12是包涵体蛋白。用His60Ni柱纯化蛋白,并对包涵体蛋白进行复性。经过Western blot分析,重组蛋白Hsp70、TRAP、P12均具有良好的反应原性。2、犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体间接ELISA检测方法的建立为筛选适用于犬吉氏巴贝斯虫的血清抗体检测的ELISA抗原,将纯化的Hsp70、TRAP、P12的三个重组蛋白作为包被抗原,对间接ELISA反应条件进行了优化,确定了重组蛋白TRAP、P12间接ELISA的阴阳性判定标准;随后进行了重复性试验和特异性试验,结果表明,重组蛋白Hsp70因阳性OD450nm和阴性OD450nm差异不明显,不适合作为间接ELISA方法的包被抗原。重组蛋白TRAP、P12二者的批内和批间重复试验的变异系数均小于10%,且与其他贫血疾病的阳性血清间无交叉反应,证实本研究建立的间接ELISA方法具有良好的重复性和特异性。采用重组蛋白TRAP、P12建立的犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体间接ELISA检测结果与犬吉氏巴贝斯虫PCR病原检测结果的符合率分别为86.67%、73.33%,综合各种条件,本研究选择重组蛋白TRAP作为包被抗原,确定了犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体间接ELISA检测方法。本研究成功表达出重组蛋白Hsp70、TRAP、P12,证实了重组蛋白Hsp70、TRAP、P12均具有良好的反应原性。并以重组蛋白TRAP为犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体检测的ELISA抗原,建立了犬吉氏巴贝斯虫病的血清抗体间接ELISA检测方法,为犬吉氏巴贝斯虫病的血清学诊断提供了基础。