猪黄体（CL）由卵巢卵泡发育而来。其中,卵泡颗粒细胞会分化为颗粒-黄体细胞,后者分泌的孕酮（P4）对猪发情与妊娠调控至关重要。NR4A1作为重要的早期反应基因和转录因子,可被多种生理刺激快速诱导并参与生命活动。已有研究表明,猪黄体类固醇细胞表达NR4A1,且PGF2α能诱导大鼠黄体组织NR4A1表达上调,提示NR4A1可能参与猪黄体的形成和退化。本研究基于猪卵巢分化的颗粒细胞（颗粒-黄体细胞）模型,应用RNA干扰、RIA、CCK-8、RT-qPCR和WB等技术,探究NR4A1参与调控颗粒细胞的分化和颗粒-黄体细胞退化的作用,为进一步揭示黄体形成与退化的分子机制提供理论依据。主要内容如下:1.猪卵巢颗粒细胞体外分化模型的建立为建立猪卵巢颗粒细胞体外分化的模型,体外分离猪卵泡（5～8 mm）颗粒细胞,预培养6d（70%～80%汇集）,应用毛喉素（FSK,10 nmol·L-1）处理细胞48 h,检测细胞形态、增殖活性的变化和黄体细胞标记基因的表达;处理0～96 h检测P4水平及其合成相关蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,FSK处理48 h后改变了细胞形态,增大了细胞直径（P＜0.01）,同时降低了细胞的增殖活性（P＜0.01）。RT-qPCR结果显示,FSK抑制了颗粒细胞标记性基因促卵泡素受体（FSHR）mRNA的表达,提高了黄体细胞标记性基因前列腺素F受体（PTGFR）和促黄体素受体（LHCGR）mRNA的表达（P＜0.01）。RIA和WB结果显示,FSK处理48 h后促进了P4分泌,提高了P4合成相关蛋白StAR、CYP11A1和HSD3B的表达水平（P＜0.01）。综上,FSK能够通过抑制细胞增殖、增强孕酮合成代谢促进颗粒细胞向黄体细胞转化,以此建立颗粒细胞分化模型。2.NR4A1参与调控猪卵巢颗粒细胞分化的研究为研究NR4A1在猪卵巢颗粒细胞分化过程中的作用,将预培养6 d的猪颗粒细胞随机分为对照组、FSK处理组、siNR4A1处理组、FSK+siNR4A1处理组。处理48 h后,检测颗粒细胞的增殖、脂滴和P4合成变化。CCK-8结果表明,与对照组相比,FSK组增殖活性显著下降（P＜0.05）,而FSK+siNR4A1组的细胞增殖活性无显著变化（P＞0.05）。油红O（ORO）染色结果显示,与对照组相比,FSK显著促进了颗粒细胞脂滴积聚（P＜0.05）;而与FSK组相比,FSK+siNR4A1组脂滴含量显著减少（P＜0.05）。RIA与WB结果显示,与对照组相比,FSK显著促进了 P4分泌及其合成相关蛋白StAR、CYP11A1和HSD3B的表达（P＜0.05）,抑制了雌二醇（E2）分泌和E2合成相关蛋白CYP19A1的表达（P＜0.05）;而siNR4A1逆转了这些变化。RT-qPCR结果显示,FSK显著抑制了周期蛋白（Cyclin B1、Cyclin D1）及周期激酶（CDK1、CDK2）mRNA的表达（P＜0.05）,促进了周期抑制性激酶P21、P27 mRNA的表达（P＜0.05）;干扰NR4A1后则出现了相反的结果。综上,NR4A1参与了颗粒细胞分化,抑制NR4A1表达可减缓颗粒细胞分化的进程,为进一步研究猪卵巢黄体形成的分子机制提供科学依据。3.NR4A1介导PGF2α调控颗粒-黄体细胞凋亡和孕酮合成的研究为探究NR4A1在PGF2α诱导的猪卵巢黄体细胞退化过程中的作用,体外分离猪卵巢颗粒细胞,预培养6 d,以FSK诱导建立颗粒-黄体细胞模型,然后将细胞随机分为对照组、PGF2α处理组、siNR4A1处理组、PGF2α+siNR4A1处理组。各组处理0～24 h后,检测P4合成、凋亡相关蛋白及相关信号通路分子蛋白表达的变化。CCK-8结果表明,与对照组相比,PGF2α能显著降低颗粒-黄体细胞的活性（P＜0.05）,而PGF2α+siNR4A1处理组细胞活性较PGF2α组出现显著回升（P＜0.05）。RIA结果显示,与PGF2α组相比,抑制NR4A1表达能使P4分泌出现显著回升（P＜0.01）。WB结果显示,与PGF2α组相比,PGF2α+siNR4A1组细胞P4合成相关蛋白表达显著上升（P＜0.05）;NF-κB和凋亡相关蛋白、ATF3和磷酸化MAPKs蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）。因此,NR4A1可能通过MAPKs/ATF3和NF-κB通路促进PGF2α诱导的颗粒-黄体细胞凋亡和孕酮分泌的减少,为进一步研究猪卵巢黄体退化的分子机制提供科学依据。综上,NR4A1通过细胞增殖、凋亡及类固醇合成等途径参与调控了猪颗粒细胞分化及颗粒-黄体细胞退化过程,为进一步理解猪黄体形成和退化的分子机制提供理论依据。