【摘 要】
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目的:探究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）的代谢产物GroEL对体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨P.gingivalis致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:不同浓度P.gingivalis GroEL（2、4
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目的:探究牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）的代谢产物GroEL对体外培养的人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖活性、凋亡及炎症反应的影响,以期为探讨P.gingivalis致心血管疾病的发病机制提供理论依据。方法:不同浓度P.gingivalis GroEL（2、4、6、8、10μg/m L）处理HUVEC24 h,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。用CCK-8法检测HUVEC的增殖活性,用流式细胞术检测细胞凋亡,用实时定量逆转录聚合酶链式反应（Real-time quantitative polymerse chain reaction,RT-q PCR）及酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分别检测白细胞介素-6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素-8（Interleukin-8,IL-8）、细胞间黏附分子-1（Intracellular adhesion molecule-1,ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（Vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）、E-选择素（E-selectin）的表达水平。应用SPSS 21.0软件进行统计分析,单因素方差分析检验各组之间的差异,以P＜0.05为有统计学意义。结果:1.倒置显微镜下显示:正常HUVEC为单层贴壁生长,呈卵圆形或鹅卵石样外观,边界清晰。不同浓度P.gingivalis GroEL处理HUVEC 24 h后,2μg/m L P.gingivalis GroEL组HUVEC的正常鹅卵石样外观消失,呈成纤维细胞形态改变;4μg/m L P.gingivalis GroEL组和6μg/m L P.gingivalis GroEL组HUVEC密度下降;8μg/m L P.gingivalis GroEL组和10μg/m L P.gingivalis GroEL组表现出明显的细胞毒性,细胞形态缩小变圆和脱落;10μg/m L GST组（阴性对照组）HUVEC形态与正常HUVEC相似。2.CCK-8实验结果显示:不同浓度P.gingivalis GroEL处理HUVEC24 h后,P.gingivalis GroEL（4、6、8、10μg/m L）组OD值显著低于正常对照组和GST组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,且随着P.gingivalis GroEL浓度的增加,对细胞活性的抑制作用逐渐增加。而2μg/m L P.gingivalis GroEL组OD值与正常对照组和GST组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。3.流式细胞术实验结果显示:不同浓度P.gingivalis GroEL处理HUVEC 24 h后,P.gingivalis GroEL（4、6、8、10μg/m L）组的凋亡率显著高于正常对照组和GST组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,且随着P.gingivalis GroEL浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐增加。而2μg/m L P.gingivalis GroEL组与正常对照组和GST组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。4.RT-q PCR及ELISA实验结果显示:P.gingivalis GroEL在m RNA及蛋白水平上都显著刺激了HUVEC分泌IL-6、IL-8、ICAM-1、VCAM-1、E-selectin,与正常对照组和GST组相比,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.P.gingivalis GroEL能以浓度依赖性方式抑制HUVEC增殖活性。2.P.gingivalis GroEL能以浓度依赖性方式诱导HUVEC发生凋亡。3.P.gingivalis GroEL还能引起HUVEC的炎症反应,从而在牙周炎促进动脉粥样硬化的发生中发挥着重要作用。
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