近年来，随着水产养殖业的迅猛发展，规模化、集约化养殖导致养殖环境日益恶化，为了防治细菌性病害，大量的抗菌素被应用于水产养殖过程的各个阶段，巨大的选择压力导致了养殖水域耐药细菌的种类和数量显著增加，养殖生物耐药病原菌病害的发生也越来越频繁。水产源细菌耐药性的流行不仅加大了水生动物疫病的防控难度，给养殖业造成巨大损失，而且还可通过食物链感染人体或将耐药基因转移至人体病原菌，给食品安全和人体健康带来潜在危害。因此，目前迫切需要进行水产源细菌耐药性监测研究，以促进我国水产源细菌耐药性风险评估与防控的开展，保障水产养殖业发展和食品安全，维护人体健康。目前，水生细菌的耐药性检测，大部分只是停留在耐药表型上，主要是采用药敏纸片、MIC测定等方法。然而，随着分子生物学技术的发展，PCR等在耐药基因的检测，以及新的耐药机制发现方面发挥着非常重要作用。本研究首先从上海崇明、江苏启东、海南琼海三地区海水养殖动物和水体收集弧菌样本，按弧菌科细菌的鉴定方法对所采集弧菌鉴定到种。按照美国临床试验室标准化委员会(National committee for clinical laboratory，NCCLS)推荐的方法和结果判读标准，应用纸片扩散法（K-B）法测定了三地区的分离株对常用15种抗菌药物的耐药情况，从而对不同地区养殖水体弧菌分离株的耐药情况进行评价分析。然后，根据药敏试验结果，对于多重耐药菌株，采用PCR技术对其携带Ⅰ类整合子情况进行检测，同时对整合子阳性菌株携带基因盒进行分析。本实验分两部分进行。1.不同地区养殖动物和水体弧菌分离株耐药性调查2009年~2011年间，从上海崇明、江苏启东、海南琼海三地养殖动物和水体共分离到弧菌224株，其中上海69株、江苏84株、海南71株。采用纸片扩散法（K-B）对15种常用抗菌药物进行药敏试验。结果显示：224株弧菌对15种抗菌药物均表现出不同程度的耐药性，不同地区分离弧菌对抗生素的耐药情况大体一致，但是对个别抗生素存在地区差异。不同地区的分离株均对氨基糖苷类，磺胺类的耐药率较高。三地区对妥布霉素、复方新诺明、新生霉素、利福平的耐药率均较高（≥60%），对新霉素的耐药率维持在较低的水平，较为敏感。三地区对壮观霉素的耐药率都维持在40%左右。上海、江苏、海南三地区分离的菌株对氨基糖苷类的卡那霉素、新霉素、壮观霉素都表现出中介值较高的情况，这有可能预示着耐药趋势的继续升高。多重耐药结果分析显示，上海地区分离菌株多重耐药率为100%，江苏地区分离菌株多重耐药率为76.2%，海南地区分离菌株多重耐药率为77.5%，由此可见，海水弧菌的多重耐药现象严重。比较三地区的多重耐药结果，多重耐药菌株集中在耐3种药物到7种药物之间。上海地区，耐7种药物菌株数最多，其次为耐4、6种药物；江苏地区，耐4种药物菌株数最多，其次为耐5种药物；海南地区，耐5种药物菌株数最多，其次为耐3种药物。2.海水弧菌分离株整合子-基因盒检测采用PCR方法扩增188株多重耐药菌株基因组DNA、质粒DNA上的Ⅰ类整合子的整合酶基因IntⅠ1、可变区、3，-保守端。PCR检测结果显示，有84株基因组DNA上、56株质粒DNA上检测到IntⅠ1，检出率分别为44.7%，29.8%，对IntⅠ1阳性菌株进行可变区扩增，扩增结果显示，基因组DNA上有44株扩出基因盒片段，质粒DNA上有34株扩出基因盒片段。对可变区PCR扩增产物用Hinf1核酸内切酶进行酶切，结果发现，可变区扩增片段长度相同，其酶切图谱也相同，说明相同长度可变区其携带的耐药基因盒也相同。测序结果显示，所有菌株均扩出一种基因盒，即dfrA12+orf+aadA2，长度为1900bp，其编码对磺胺类和氨基糖苷类药物的耐药。分析Ⅰ类整合子与多重耐药性的关系，结果发现：单个菌株所携带的耐药基因与表型之间并没有完全的对应关系，但整合子在耐药菌株上的分布相对比较集中。上海崇明地区，多重耐药菌株集中在耐4种药物到7种药物之间，共有53株，基因组DNA上有22株检测出Ⅰ类整合子、质粒DNA上有15株检测出Ⅰ类整合子；江苏启东地区多重耐药菌株集中在耐3种药物到7种药物之间，共有58株，基因组DNA上有6株检测出Ⅰ类整合子、质粒DNA上有9株检测出Ⅰ类整合子；海南琼海地区，多重耐药菌株集中在耐3种药物到7种药物之间，共有48株，基因组DNA上有16株检测出Ⅰ类整合子、质粒DNA上有10株检测出Ⅰ类整合子。本研究中，Ⅰ类整合子检测结果为阳性的菌株全部表现为多重耐药。说明细菌的多重耐药性与Ⅰ类整合子之间存在着密切的关系。