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目的：建立用双平台法(流式细胞仪和血细胞计数仪)检测人外周血淋巴细胞亚类绝对数及相对数的流式方法,分析更精细的淋巴细胞亚群数量,并将此方法应用于Wiskott-Aldrich综合征患儿,全面评估患儿免疫功能。方法：取人EDTA抗凝外周血500 μl,200 μl用于血细胞计数仪测得淋巴细胞绝对数；300 μl用于流式细胞分析,通过特异性单克隆抗体与细胞表面抗原作用,测得所需淋巴细胞亚群相对数。各淋巴细胞亚群相对数(百分率)×淋巴细胞绝对数,即得到各淋巴细胞亚群绝对数。采用此方法检测2014年6月至2015年3月于我院就医的20例男性WAS患儿,年龄4月到4岁不等,这些WAS患儿均经基因检测及WASp蛋白检测确诊。利用精细免疫分型方法,从传统淋巴细胞分类、B细胞精细免疫分型和T细胞精细免疫分型分析WAS患儿淋巴细胞亚群数量变化。结果：成功建立精细免疫分型流式检测方法,并通过全血标本与PBMC标本对比证实全血标本检测是可靠的。检测WAS患儿所有细胞亚群均经过正态检验,正态分布的指标采取配对T检验进行统计学分析；非正态分布的指标采取Wilcoxon配对符号秩和检验进行统计学分析。WAS患儿Th细胞百分数和绝对数均低于正常同龄对照；NK细胞的百分数和相对数明显高于正常对照；而B细胞的百分数和绝对数明显低于正常儿童；WAS患儿CD8 naive亚群百分数和绝对数均明显少于正常对照；CD8 EM亚群百分数和绝对数大于正常对照；WAS患儿CD8 TEMRA和CD8 CM亚群比例增高,与正常对照相比有统计学差异。WAS患儿B细胞4个亚群(记忆、初始、过渡B细胞和浆母细胞)明显低于正常对照,均有统计学差异。结论：(1)成功建立了使用微量抗凝外周血检测精细淋巴细胞亚群的多色流式分析方法,利用本方法进行的正常儿童免疫细胞精细分型参考范围正在制定中。(2)本研究检测了WAS患儿中20群淋巴细胞精细亚群的数量变化,发现WASp缺陷导致外周血B细胞及亚群数量明显下降,外周血中B细胞分布异常,免疫稳态紊乱；在非感染状态下,初始T细胞较正常对照降低,效应记忆T细胞与正常对照相比升高,可能与T细胞免疫应答异常有关。(3)本研究发现部分WAS患儿DNT细胞、过渡B细胞和数量近乎为0；部分患儿CD8 TEMRA明显增高,达T细胞的50%。对这部分患儿还需结合临床病程、用药进一步分析。