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目的:肿瘤细胞常因过度增殖导致其周边的微环境处于缺血、缺氧的能量不足状态,而研究发现ARK5参与肿瘤细胞对局部代谢变化的耐受过程,并促进肿瘤细胞的存活、侵袭和转移。因此,本实验拟构建ARK5-RNAi慢病毒载体,详细探讨ARK5基因沉默与5-FU联合后对人胃癌细胞SGC7901生物学行为的影响。方法:设计三条靶向ARK5基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)序列及一条阴性对照(negative control,NC)序列,构建重组慢病毒;用带有荧光(GFP)的阴性对照慢病毒筛选慢病毒感染胃癌细胞SGC7901的最佳条件,Western Blot检测ARK5基因沉默效果,筛选出基因沉默效果最显著的干扰靶点;MTT检测ARK5基因沉默和5-FU联合对SGC7901细胞增殖的抑制作用,确定抑制作用最明显时的5-FU浓度,并将实验分为6组:正常对照组(Control)、阴性对照组(NC)、ARK5-RNAi慢病毒感染组(ARK5-RNAi)、正常对照+5-FU组(Control+5-FU)、阴性对照+5-FU组(NC+5-FU)、ARK5-RNAi慢病毒感染+5-FU组(ARK5-RNAi+5-FU),用细胞划痕实验、Transwell小室侵袭实验、流式细胞仪分别检测各组细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞凋亡及细胞周期的情况,每组重复6次。结果:1、基因测序结果显示:三种ARK5-RNAi重组慢病毒表达载体构建成功;2、带荧光的阴性对照慢病毒感染SGC7901的结果表明:MOI值50,感染体系为ENI.S.+Polybrene时,慢病毒感染SGC7901细胞的效果最佳;3、Western Blot结果显示:ARK5-RNAi-3重组慢病毒能明显下调ARK5的蛋白表达,与NC组比较具有显著性差异(p<0.01);4、MTT比色法检测结果显示,SGC7901的细胞生长抑制率随5-FU浓度增加而增加;ARK5基因沉默和5-FU均能抑制胃癌细胞SGC7901的体外增殖,两者联合后,细胞的增殖抑制更明显;ARK5基因沉默与10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml的5-FU联用时均具有协同作用,5-FU 40μg/ml浓度时此作用最大。5、ARK5基因沉默后,ARK5-RNAi组细胞的体外迁移和侵袭能力较Control组降低,细胞凋亡率增多,细胞周期被阻滞,结果均具有显著统计学意义(p<0.01);Control+5-FU组对SGC7901细胞的肿瘤生物学行为有相似的影响;ARK5-RNAi+5-FU组分别与ARK5-RNAi组、Control+5-FU组比较,胃癌细胞的体外迁移和侵袭能力明显降低,细胞凋亡率显著增多,细胞周期阻滞更明显(p<0.01)。结论:ARK5基因沉默后,胃癌细胞SGC7901的生物学行为明显被抑制,说明ARK5在促胃癌发生、发展过程中发挥重要作用;联合5-FU后,肿瘤细胞的生物学行为进一步被抑制,提示ARK5-RNAi及5-FU联合使用对于胃癌细胞的肿瘤生物学行为具有协同抑制效应。