【摘 要】
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长期食用含有抗生素残留的食物可能会导致人类患诸多疾病,如心血管衰竭、肠炎胃炎、肝肾功能损伤、过敏反应等。氯霉素（CAP）是目前最常见的残留抗生素之一,近几年的报道显示,CAP在动物源性食品中的检出率很高,因此需要发展快速高灵敏的检测方法增强对CAP的残留监测。以DNA为模板的银纳米簇（DNA-AgNCs）具有合成简便、波长可调、制备成本低等优点,基于DNA-AgNCs构建的各类传感器,具有多色检测
【基金项目】
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国家重点研发计划项目“乳与乳制品加工靶向物质危害控制技术集成应用示范”课题“乳与乳制品中抗生素、毒素、生物胺等食源性危害物快速检测及在线监控”（2018YFC1604202）；
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长期食用含有抗生素残留的食物可能会导致人类患诸多疾病,如心血管衰竭、肠炎胃炎、肝肾功能损伤、过敏反应等。氯霉素（CAP）是目前最常见的残留抗生素之一,近几年的报道显示,CAP在动物源性食品中的检出率很高,因此需要发展快速高灵敏的检测方法增强对CAP的残留监测。以DNA为模板的银纳米簇（DNA-AgNCs）具有合成简便、波长可调、制备成本低等优点,基于DNA-AgNCs构建的各类传感器,具有多色检测、灵活信号输出等特点,近些年受到研究者的广泛关注,并应用于化学分析、环境检测、食品安全、疾病诊断、医学治疗等领域。本论文以CAP为检测对象,基于CAP适配体设计识别探针,使用DNA-AgNCs作为探针的信号输出方式,设计了三种CAP荧光检测方案,内容如下:（1）构建了基于CAP适配体自模板的“on-off”荧光检测方法。基于C-Ag-C介导CAP适配体形成发卡结构原理,以该发卡为模板开展DNA-AgNCs合成条件研究,优化了硝酸银与DNA浓度比、缓冲液类型、p H、反应时间等合成条件,得到量子产率为16.36%的DNA-AgNCs;进而基于CAP对该DNA-AgNCs的猝灭响应,建立了检测CAP的荧光方法,此方法设计简单,可在常温下实现对CAP的快速检测,在0.5-20 nmol/L的CAP浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=0.02867X+0.15709,R~2=0.997,最低检出限为0.052 nmol/L。（2）借助足点介导的链置换反应技术,建立了基于DNA三通结的“off-on”CAP检测方法。开展三通结探针设计研究,包括适配体互补数、三通结碱基臂长、AgNCs模板序列等,使用三通结探针合成了具有良好荧光量子产率（17.54%）的DNA-AgNCs,并对其进行了TEM表征;开展缓冲液类型、p H、反应时间等实验条件优化,建立了CAP的“off-on”荧光检测方法,在1-10 nmol/L的浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=0.0484X+0.8523,R~2=0.9981,最低检出限为0.89 nmol/L。（3）发展了基于dimer银簇及DNA三通结的双信号比率检测方法。首先通过一系列的合成筛选得到了具有红色和黄色荧光发射的DNA-AgNCs,对其进行了TEM表征,其次通过电泳及荧光实验优化了三通结探针的碱基连接数量,进而优化了温度、银簇合成参数、硝酸银、硼氢化钠和DNA的浓度比、缓冲液类型、p H等反应条件,建立了比率型CAP荧光检测方法,在0.01-0.5 nmol/L的浓度范围内,荧光强度和CAP浓度之间有着良好的线性关系,得到的线性方程为Y=1.0543X+0.0867,R~2=0.9887,最低检出限为9.8 pmol/L。
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