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[目的]1、采用“二袖套”法构建SD大鼠心脏死亡供体肝移植模型,构建HO-1过表达和HO-1 shRNA重组腺相关病毒并转染大鼠,重组体内HO-1基因,诱导肝脏HO-1特异性过表达或表达降低,探讨腺相关病毒预处理SD大鼠干预HO-1表达对心脏死亡供体肝移植术后大鼠生存率的影响;2、对SD大鼠进行心脏死亡供体肝移植,分析术后移植肝经历不同时长的缺血再灌注损伤后,HO-1的表达随时间的变化,证明心脏死亡供体肝移植术后HO-1的表达存在时间依赖性,并且进一步探索心脏死亡供体移植肝术后肝功能损伤的机制;3、利用HO-1过表达和HO-1 shRNA重组腺相关病毒转染SD大鼠,诱导肝脏HO-1特异性过表达或表达降低,探讨腺相关病毒预处理SD大鼠干预供肝HO-1表达对心脏死亡供体肝移植术后移植肝的保护机制。[方法]1、选取280～300g、8～10周龄SD大鼠,在供体心脏停跳10min后进行4℃冷灌注保存,冷保存时间为4h,采用“二袖套”法建立心脏死亡供体肝移植模型。2、构建HO-1过表达和HO-1 shRNA重组腺相关病毒并经尾静脉注射转染150～180g、5～6周龄SD大鼠,饲养21天后通过RT-qPCR检测其体内转染效率。3、心脏死亡供体肝移植术后缺血再灌注损伤6h,24h,72h,168h后,通过 Western blot 检测肝脏组织中蛋白 HO-1、SIRT1、pro-caspase-1、p22、full-GSDMD、cleaved-N-GSDMD的表达情况。免疫组织化学检测石蜡标本中NLRP3的表达情况。全自动生化分析仪检测血清ALT和AST,评价肝功能。石蜡切片HE染色观察肝组织病理损伤程度。ELISA检测肝组织中IL-1β和IL-18的含量。流式细胞仪检测肝细胞中ROS的表达水平,评价氧化应激反应程度。4、HO-1过表达和HO-1 shRNA重组腺相关病毒转染供体大鼠后行心脏死亡供体肝移植,选取术后缺血再灌注损伤6h时间点,采用RT-qPCR和Western blot检测肝脏组织中HO-1的表达水平。通过Western blot检测蛋白SIRT1、pro-caspase-1、p22、full-GSDMD、cleaved-N-GSDMD的表达情况。免疫组织化学检测石蜡标本中NLRP3的表达情况。全自动生化分析仪检测血清ALT和AST,评价肝功能。石蜡切片HE染色观察肝组织病理损伤程度。ELISA检测肝组织中IL-1β和IL-18的含量。流式细胞仪检测肝细胞中ROS的表达水平,评价氧化应激反应程度。5、使用统计学软件SPSS24.0进行数据分析。采用Kalplan-Meier法进行生存分析统计;计量资料以x±s的形式表示,多组计量资料比较采用单因素方差分析,先进性方差齐性检验,方差齐则进一步采用LSD检验;方差不齐则选用Dunnett’s T3检验。P<0.05认为差异具有统计学意义。统计图采用GraphPad Prism 8.0软件绘制。[结果]1、HO-1过表达、HO-1 shRNA重组腺相关病毒转染SD大鼠后所致HO-1基因转录水平的差异具有统计学意义（P<0.05）。2、SD大鼠心脏死亡供体肝移植模型构建成功,且HO-1过表达、HO-1 shRNA重组腺相关病毒转染供体大鼠后所得到的术后生存时间的差异具有统计学意义（P<0.05）。3、HO-1表达与DCD肝移植术后缺血再灌注损伤具有时间依赖性,且近期（6h和24h）升高最为明显,与对照组相比差表达异均具有统计学意义（P<0.05）,而远期（72h和168h）逐渐下降,虽然表达仍高于对照组,但是与近期的差异也具有统计学意义（P<0.05）;术后缺血再灌注损伤近期ROS,ALT,AST表达均显著升高,较对照组差异具有统计学意义（P<0.05）,而远期逐渐下降;HE染色显示近期组织坏死严重,Suzuki评分发现近期损伤与对照组以及远期的损伤相比较,差异均具有统计学意义（P<0.05）;同时 western blot 检测 SIRT1、pro-caspase-1、p22、full-GSDMD、cleaved-N-GSDMD,SIRT1 表达趋势与 HO-1一致,pro-caspase-1、p22、full-GSDMD、cleaved-N-GSDMD在近期显著升高,而远期则表达降低;免疫组织化学检测NLRP3发现近期6h表达量最低,而后呈现随时间迁移由高逐渐降低。4、HO-1过表达和HO-1 shRNA重组腺相关病毒转染供体大鼠后行心脏死亡供体肝移植。术后缺血再灌注损伤6h时,与HO-1干扰表达组相比,HO-1过表达组 ROS、IL-1β、IL-18、ALT、AST 均显著降低（P<0.05）,p22、cleaved-N-GSDMD 的表达也被显著抑制（P<0.05）;同时 HE 染色 Suzuki 评分证实了HO-1过表达组移植肝术后缺血再灌注损伤较HO-1干扰表达组明显减轻（P<0.05）;免疫组织化学检测发现HO-1过表达组NLRP3表达量较对照组显著降低,但是HO-1干扰表达组NLRP3的表达量比HO-1过表达组还要低,此原因可能是坏死加重,无正常肝组织结构所致。[结论]1、采用“二袖套”法成功构建SD大鼠心脏死亡供体肝移植模型。2、细胞焦亡是心脏死亡供体移植肝术后缺血再灌注损伤发生的机制之一,且于再灌注早期最为严重,之后逐渐缓解。3、预处理供体使HO-1高表达,可通过SIRT1-线粒体途径抑制肝细胞焦亡的发生,从而减轻SD大鼠心脏死亡供体移植肝缺血再灌注损伤。