【摘 要】
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目的:通过对酸碱修饰的橘皮果胶（p H-modified Citrus Pectin,MCP）进行分离纯化与基本结构分析,分析MCP中抑制galectin-8的主要活性成分,探讨MCP中活性组分与galectin-8相互作用的初步构效关系。方法:采用酸碱修饰的方法制得MCP,经体积分数为30%、50%、70%的乙醇逐步醇沉的方法对MCP进行初步分级后,得到三个组分,即MCP-30、MCP-50、M
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目的:通过对酸碱修饰的橘皮果胶（p H-modified Citrus Pectin,MCP）进行分离纯化与基本结构分析,分析MCP中抑制galectin-8的主要活性成分,探讨MCP中活性组分与galectin-8相互作用的初步构效关系。方法:采用酸碱修饰的方法制得MCP,经体积分数为30%、50%、70%的乙醇逐步醇沉的方法对MCP进行初步分级后,得到三个组分,即MCP-30、MCP-50、MCP-70。使用DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱层析与多个分子筛,对活性最强组分MCP-30进一步分离纯化,得到1个中性糖组分MCP-30-N和3个酸性糖组分MCP-30-1、-3、-5。采用HPLC柱前衍生化法对上述MCP各组分进行单糖组成分析。采用HPGPC分析MCP组分的平均分子量。采用现代分子生物学方法,使用载体p ET-28a构建galectin-8质粒,通过大肠杆菌原核表达galectin-8蛋白,经lactosyl-Sepharose CL-6B亲和层析柱分离出纯度较高的galectin-8蛋白。采用半乳糖凝集素-8介导的红细胞凝集法（Galectin-8-mediated Hemagglutination,G8H）和荧光光谱法分析MCP组分与galectin-8的相互作用,综合评价MCP各组分抑制galectin-8的活性。使用β-半乳糖苷酶与果胶酶分别对MCP-30-3进行酶解,分别得到酶解产物MCP-30-3-Gal和MCP-30-3-Gal A。通过研究酶解产物抑制galectin-8的活性,初步探讨MCP-30-3与galectin-8相互作用的构效关系。结果:CP经酸碱处理后,制得MCP,产率约为82.2%。MCP经逐步醇沉,制得三个组分,MCP-30（产率约为60.0%）,MCP-50（产率约为17.5%）,MCP-70（产率约为1.4%）。MCP-30进一步分离纯化后,得到四个组分,即中性糖组分MCP-30-N（产率约为35.0%）和酸性糖组分MCP-30-1（产率约为13.8%）、MCP-30-3（产率为29.2%）、MCP-30-5（产率约为14.8%）。单糖组成结果表明,MCP-30-N主要由Glc（95.4%）和少量Gal（4.6%）构成;MCP-30-1主要由Gal（26.3%）、Gal A（25.5%）、Glc（21.5）构成;MCP-30-3由Gal（46.1%）和Gal A（36.7%）、Glc（20.2%）构成;MCP-30-5由Gal（35.9%）、Gal A（34.8%）、Glc（29.3%）构成。经Sephadex G-75、Sephadex G-150和Superdex G-200检测MCP-30-3具有良好的均一性,其分子量约为168 k Da。制得galectin-8蛋白,SDS-Page蛋白电泳验证其纯度较高。G8H法结果表明,MCP的MIC值为0.313mg/m L。MCP-30的MIC为0.078 mg/m L、MCP-50的MIC为0.625 mg/m L、MCP-70的MIC大于5.000 mg/m L;MCP-30-N的MIC大于5 mg/m L、MCP-30-1的MIC为0.313 mg/m L、MCP-30-3的MIC为0.039 mg/m L、MCP-30-50的MIC为0.625mg/m L。MCP-30-3经β-半乳糖苷酶酶解后产物MCP-30-3-Gal经G8H测得MIC＞5 mg/m L,基本无抑制galectin-8的活性。经果胶酶酶解后产物MCP-30-3-Gal A经G8H测得MIC=1.25 mg/m L,抑制galectin-8活性降低约32倍。结论:采用多种方法对MCP进行了较为系统的分离纯化,基本明确了MCP中抑制galectin-8的主要活性成分（MCP-30-3）。初步探讨了MCP-30-3中Gal与Gal A残基对活性的影响与构效关系。
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