【摘 要】
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第一部分LC-MS/MS法测定大鼠血浆5-羟色胺和替格瑞洛及血小板5-羟色胺浓度目的:建立液质联用方法同时测定大鼠血浆中5-HT及替格瑞洛浓度,测定血小板中5-HT浓度,考察替格瑞洛用药后大鼠血浆和血小板内5-HT浓度变化。方法:色谱柱为Symmetry C18柱（4.6 mm×150.0 mm,3.5μm）,流动相选用乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;电喷雾离子源正离子模式多反应监测,磺胺甲噁
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第一部分LC-MS/MS法测定大鼠血浆5-羟色胺和替格瑞洛及血小板5-羟色胺浓度目的:建立液质联用方法同时测定大鼠血浆中5-HT及替格瑞洛浓度,测定血小板中5-HT浓度,考察替格瑞洛用药后大鼠血浆和血小板内5-HT浓度变化。方法:色谱柱为Symmetry C18柱（4.6 mm×150.0 mm,3.5μm）,流动相选用乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;电喷雾离子源正离子模式多反应监测,磺胺甲噁唑作内标,5-HT、替格瑞洛及内标的定量离子对分别为m/z:177.0→160.1,m/z:523.2→153.1,m/z:254.1→156.2。大鼠随机分为三组,分别用替格瑞洛4.5 mg·kg-1,9 mg·kg-1以及15 mg·kg-1灌胃,每日给药两次,连续给药3日。三组大鼠于给药前和末次给药2 h后眼内眦取血,离心得到血浆和血小板样品,用乙腈沉淀蛋白后测定5-HT及替格瑞洛浓度。结果:大鼠血浆中5-HT和替格瑞洛分别在10～500 ng·m L-1和20～1000 ng·m L-1范围内线性良好,定量下限分别为10 ng·m L-1和20 ng·m L-1,标准曲线方程分别为y=0.002258x-0.001112（R~2=0.9962）和y=0.005974x+0.077975（R~2=0.9960）,血小板中5-HT在50～2000 ng·m L-1范围内线性关系良好,定量下限为50 ng·m L-1,标准曲线方程为y=0.000827x+0.021235（R~2=0.9984）。两种基质中待测物质的日内和日间精密度均小于10%,基质效应、提取回收率和稳定性均能满足测定要求。低、中、高剂量组大鼠给药后血浆5-HT浓度均升高,具有统计学意义（P＜0.05）;三组组大鼠给药后血小板5-HT浓度均降低,结果具有统计学意义（P＜0.05）。给药前后血浆与血小板中5-HT浓度变化与替格瑞洛浓度无相关性（P＞0.05）。三组大鼠之间给药前后血浆5-HT变化程度与血小板5-HT变化程度均无统计学差异（P＞0.05）。结论:本实验建立的LC-MS/MS方法专属性好,准确度和灵敏度高,操作简便,适用于大鼠血浆和血小板5-HT和替格瑞洛的测定。替格瑞洛会使大鼠血浆5-HT浓度升高,血小板5-HT浓度降低。第二部分替格瑞洛对大鼠血小板5-羟色胺转运体蛋白表达的影响目的:探究替格瑞洛对大鼠血小板SERT蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为三组,分别给予替格瑞洛4.5 mg·kg-1,9 mg·kg-1以及15 mg·kg-1灌胃,每日给药两次,连续给药3日。三组大鼠于给药前和末次给药2 h后眼内眦取血,离心得到血小板样品。Western blot法测定给药前后血小板SERT的表达。结果:低剂量组血小板SERT表达量给药前后分别为0.82±0.12和0.66±0.15;中剂量组给药前为0.82±0.11,给药后为0.67±0.17,高剂量组给药前为0.82±0.14,给药后为0.58±0.17;三组变化均具有统计学意义（P＜0.05）。低剂量组p-SERT表达量给药前后分别为0.74±0.22和0.60±0.16,变化无统计学意义（P＞0.05）;中剂量组给药前后分别为0.74±0.23和0.50±0.15,变化有统计学意义（P＜0.05）;高剂量组给药前后分别为0.73±0.21和0.31±0.14,变化有统计学意义（P＜0.05）。结论:替格瑞洛会使大鼠血小板SERT蛋白表达降低,说明替格瑞洛对大鼠血小板SERT具有抑制作用。
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