论文部分内容阅读
目的：建立裸鼠人胃癌皮下瘤模型，观察枸橼酸芬太尼对裸鼠人胃癌皮下瘤的生长影响，并探究其相关分子机制，为其在临床癌痛治疗中的应用提供理论指导。方法：体外培养MGC-803细胞，取对数生长期细胞，制备细胞悬液，并接种于裸鼠右侧腋窝皮下，建立裸鼠人胃癌皮下瘤模型。建模后，从32裸鼠中剔除皮下瘤体积最大和最小的两只，将剩余的30只裸鼠采用随机数字表法随机分成6组：对照组(C组)、1.5ml/kg生理盐水组（N组）、0.05mg/kg芬太尼组（F1组）、0.1mg/kg芬太尼组（F2组）、0.2mg/kg芬太尼组（F3组）、0.4mg/kg芬太尼组（F4组）。每组5只。C组不做任何处理，N组、F1组、F2组、F3组、F4组每天分别腹腔注射1.5ml/kg生理盐水、0.05mg/kg芬太尼、0.1mg/kg芬太尼、0.2mg/kg芬太尼、0.4mg/kg芬太尼。用药14d后拉颈处死裸鼠，完整剥离肿瘤；每2d测量一次肿瘤的长径和短径，计算肿瘤体积和相对体积（RTV）并绘制肿瘤的生长曲线；透射电子显微镜观察（TEM）肿瘤组织的形态学变化；免疫组织化学染色法分析皮下瘤组织中的NF-κB、Bcl-2、Bax、VEGF、MMP-9的表达情况;半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肿瘤组织中NF-κB、Bcl-2、Bax、VEGF、MMP-9基因mRNA的表达；免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中NF-κB、Bcl-2、Bax、VEGF、 MMP-9基因蛋白的表达。结果：与C组的肿瘤体积（3.36±0.68）比较，F1、F2、F3、F4组裸鼠皮下瘤RTV明显减小（P＜0.05），分别为（2.03±0.52）、（2.09±0.46）、（2.25±0.26）、（2.56±0.54），N组（3.19±0.60）与C组的肿瘤体积差异无统计学意义（P＞0.05）。C组、N组皮下瘤组织细胞形态结构基本正常， F1、F2、F3、F4组皮下瘤组织细胞呈现核肿胀、染色质边集、染色质减少、核碎裂。与C组比较，F1、F2、F3、F4组皮下瘤细胞内NF-κB、Bcl-2、VEGF、MMP-9的积分光密度值表达量下降，而Bax的积分光密度值表达量增加（P＜0.05）；N组与C组的积分光密度值比较，差异无统计学意义（P＞0.05），RT-PCR和Western blot结果显示：与C组比较，F1、F2、F3、F4组裸鼠人胃癌皮下瘤中NF-κB、Bcl-2、VEGF、MMP-9mRNA和蛋白表达均降低，而Bax mRNA和蛋白表达增加；N组与C组的NF-κB、Bcl-2、Bax、VEGF、MMP-9表达比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：枸橼酸芬太尼能够抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长及增值，其机制可能是通过抑制NF-κB的表达，进而改变Bcl-2/Bax比值（降低Bcl-2表达量和增加Bax表达量）、下调VEGF、MMP-9的表达量，从而发挥其作用。