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背景：支气管哮喘是临床内、儿科常见的，严重危害健康的慢性疾病，近年其发病率、死亡率逐年增高，严重威胁人类健康，因此日益受到世界各国的重视。对其发病机制已有多方面的探讨，但仍有许多尚未明了。文献研究表明，淋巴细胞中Th1／Th2细胞的比例失衡，如Th1减少，Th2增加是支气管哮喘的重要发病机制，这一失衡可引起Th2类细胞因子如：IL-5等产生过多，Th1类细胞因子如IFN-γ产生减少。越来越多的证据表明，IL-5可激活嗜酸性粒细胞(EOS)并诱导EOS肺部浸润，从而引发受累器官(肺、支气管)的慢性炎症。因此，以IL-5为靶点的抗哮喘主动免疫基因治疗具有良好的应用前景。 目的：制备人IL-5 DNA疫苗(hIL-5)，鉴定其在真核细胞有效表达后，用该疫苗免疫小鼠，通过hIL-5诱导抗小鼠IL-5的交叉反应来打破小鼠免疫系统对自身IL-5的免疫耐受，产生抗自身IL-5抗体。 方法：我们从Invivogen公司购回分别含有人和小鼠IL-5全段基因的克隆质粒载体PORF9-hIL5和PORF9-mIL5，用Premier Primer 5.0软件辅助设计PCR引物，通过PCR技术将人和小鼠IL-5基因扩增。然后利用基因工程技术，通过酶切、连接反应，将目的基因构建于真核表达质粒pcDNA3.1(+)中，在体外转染真核细胞(COS-1)，通过Western blot的检测方法其证实有效表达后，在大肠杆菌中扩增并回收大量质粒，用这些真核表达质粒作为DNA疫苗，肌肉注射免疫小鼠，利用Western blot方法检测是否产生抗小鼠自身IL-5的体液免疫反应。 结果：通过酶切、测序鉴定证实构建了正确的含人IL-5(hIL-5)和小鼠IL-5(mIL-5)的真核表达重组质粒。利用Western blot方法鉴定均能够在真核细胞COS-1中有效表达相应的蛋白质分子。并且大量制备和纯化了这二个DNA质粒和相应的空对照质粒，用这三种质粒及生理盐水分别免疫小鼠，在第四次免疫后一周收集外周血，Western blot检测发现hIL-5质粒免疫小鼠血清中有抗小鼠IL-5的特异性抗体存在，而mIL-5质粒、空质粒及生理盐水对照组免疫的小鼠血清中没有检测到抗小鼠IL-5的特异性抗体存在。 结论：利用与哮喘相关的异种同源基因疫苗(人IL-5 DNA疫苗)来打破免疫耐受，诱导产生种与种之间的交叉免疫反应，为将来研究哮喘的防治奠定坚实的理论基础。