论文部分内容阅读
目的：研究BMSCs移植对β-淀粉样蛋白诱导的老年性痴呆模型大鼠行为学的影响,并探讨其治疗AD的可能机制,为老年性痴呆的临床治疗提供更多有价值的实验依据和方法。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离BMSCs, BMSCs移植前掺入10 mg/L的BrdU进行标记。采用向成年雄性SD大鼠双侧海马立体定向注射Aβ1-40的方法诱导AD动物模型,将实验动物随机分为对照组(生理盐水组)、模型组(痴呆组)与移植组,模型组、移植组左右侧海马各注射5μLAβ1-40(10μg)溶液,对照组注射等量生理盐水。移植组造模后3周采用同样方法移植骨髓间充质干细胞,对照组及模型组大鼠不做处理。采用Morris水迷宫观察比较大鼠移植前后的行为学变化。造模后2个月处死大鼠,以免疫组化检查(Brdu+NSE、Brdu+GFAP及nestin单染阳性细胞)为客观指标,观察移植后的BMSCs在大鼠脑内存活及分化情况。结果：1.通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离大鼠骨髓用充质干细胞,经流式细胞仪检测所分离出的细胞,结果显示细胞表达CD90和CD29,符合BMSCs的形态及细胞表面标志物等特性,并且可在体外进行分化、传代、扩增,具有良好的自我更新能力和多向分化潜能,证实分离所得细胞为骨髓间充质干细胞;2.采用向大鼠双侧海马立体定向注射Aβ1-40的方法制作AD动物模型,模型组大鼠逃避潜伏期(57.12±6.43s),较对照组(41.35±6.34s)明显延长(P<0.05),同时模型组大鼠跨越平台次数(1.9±0.75),较对照组(5.2±1.96)减少(P<0.05),说明造模成功,同时为后期的BMSCs定位移植治疗痴呆大鼠提供了较适宜的条件；3. BMSCs移植组大鼠逃避潜伏期(35.56±4.29s)较模型组(52.95±4.86s)缩短(P<0.05),移植组跨越平台次数(5.5±1.84),较模型组大鼠(1.8±0.92)明显增多；4.移植组大鼠海马组织及其周围可见BrdU+NSE、BrdU+GFAP免疫组织化学双染阳性细胞。结论：(1)BMSCs可以在体外分离、培养、传代、扩增。(2)采用SD大鼠双侧海马立体定向注射Aβ1-40的方法制作的AD动物模型较稳定,可用于AD动物实验研究。(3)BMSCs移植可以在宿主脑内存活并分化为神经元样细胞和神经胶质细胞样细胞,促进AD大鼠空间学习记忆能力恢复。(4)BMSCs移植安全有效,有望成为治疗AD的新手段。