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本文共分为四章,包括:酶的应用与常用的测定方法综述;以罗丹明为标记物的蛋白酶荧光各向异性均相分析法;吖啶橙—纤维素复合物的制备及纤维素酶的荧光分析;吖啶橙—淀粉复合物的制备和淀粉酶的荧光分析。
第一章为前言,介绍酶在医药、食品、工业、环境保护等方面的实际应用与重要意义,评述了目前常用于检测酶的方法,并在此基础上提出了本论文的研究设想。
第二章主要研究以罗丹明为标记物的荧光各向异性法均向测定蛋白酶的方法。本章主要包括五个方面的内容:1.罗丹明—牛血清白蛋白复合物的制备;2.以罗丹明—牛血清白蛋白为底物在碱性条件下检测胰蛋白酶水解活力的研究;3.以罗丹明—牛血清白蛋白为底物在中性条件下检测菠萝蛋白酶活力的研究;4.以罗丹明—牛血清白蛋白为底物在酸性条件下检测胃蛋白酶活力的研究;5.实际药品的测定。相比以往的检测方法,本研究技术灵敏度高,受pH的影响小,拓宽了荧光各向异性技术在酶学分析中的应用范围。
第三章首次报道了以吖啶橙为探针的荧光光谱分析法测定纤维素酶的方法。本章主要包括两个方面的内容:1.吖啶橙—纤维素复合物的制备;2.以吖啶橙—纤维素为底物检测纤维素酶活力的研究。本研究原理简单,易于操作,灵敏度高(可检测到纳克级的酶量),实用性强。
第四章主要研究以吖啶橙为探针检测淀粉酶的荧光光谱分析法。本章主要包括两个方面的内容:1.吖啶橙—淀粉复合物的制备;2.以吖啶橙—淀粉为底物检测淀粉酶活力的研究;3.实际样品的测定。本方法灵敏度高、线性范围宽、实用性强。