第一部分不同EGFR类型Ⅰ期肺腺癌预后的差别研究目的:探索表皮生长因子受体（EGFR）不同状态及突变亚型Ⅰ期肺腺癌患者术后生存的差别。研究方法:回顾性纳入山东省肿瘤医院和天津肿瘤医院2009年～2014年间行根治性切除术的术后Ⅰ期肺腺癌患者119例,所有患者的术后新鲜肿瘤组织或蜡块包埋组织接受EGFR基因状态检测,依据EGFR基因检测的结果将患者分为野生型组、19del突变组、L858R突变组和其他突变组,主要观察指标为各组间的术后无病生存期（DFS）,次要观察指标为总生存期（OS）。研究结果:119例患者中EGFR野生型65例,突变型54例,其中19del突变32例,L858R突变19例,其他突变3例（2例G719X、1例L861Q）。EGFR突变型更多见于非吸烟（P=0.000）和女性患者（P=0.042）。中位随访43.5个月,EGFR突变型和野生型患者之间术后DFS无显著差别（P=0.461）,但突变亚型中19del突变患者术后DFS和OS 比L858R突变患者长（P=0.028和P=0.001）。利用TCGA数据验证,也得出与上述一致的结果。研究结论:术后Ⅰ期肺腺癌患者,EGFR突变型和野生型之间生存无显著差别,但EGFR突变亚型中,19del突变患者DFS和OS 比 L858R突变患者更长。这提示EGFR突变亚型潜在的不同预后价值,19del突变和L858R突变预后存在差别。第二部分19del和L858R突变亚型肺腺癌蛋白表达的差别研究目的:E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、趋化因子受体4（CXCR4）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）均与肺腺癌的侵袭转移及预后相关,第一部分研究显示两种突变亚型患者的预后存在差别,是否上述蛋白标记物的表达也存在差别?我们通过免疫组化方法筛选出表达存在差别的蛋白标记物,为后续细胞、动物实验及分子机制研究奠定基础。研究方法:通过免疫组化方法检测19del突变和L858R突变肺腺癌患者组织标本内 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、CXCR4 和 MMP-9 五种蛋白标记物的表达,卡方检验两者之间表达存在差异的蛋白标记物。研究结果:免疫组化显示N-cadherin和Vimentin在两组肺腺癌患者的组织中均未见阳性表达,E-cadherin阳性主要在细胞膜表达,CXCR4和MMP-9阳性主要在细胞质表达。卡方检验显示L858R突变组患者组织内CXCR4的表达更高（P=0.003）,19del突变组患者E-cadherin的表达更高（P=0.004）,而不同突变亚型患者之间MMP-9的表达无统计学差别（P=0.180）。研究结论:免疫组化初筛显示CXCR4和E-cadherin两种标记物的表达在不同EGFR突变亚型肺腺癌之间存在差别,L858R突变CXCR4的表达更高,19del突变E-cadherin的表达更高。第三部分L858R突变通过MEK-ERK通路上调CXCR4的表达增强细胞恶性行为研究目的:基于上述两部分研究结果,进一步探究不同EGFR突变亚型细胞之间迁移、增殖、侵袭和转移的差别,并围绕CXCR4和E-cadherin探索造成这些差别的相关通路及可能的分子机制。研究方法:选用EGFR野生型肺腺癌A549细胞,通过CRISPR/Cas9技术获得19外显子缺失突变型细胞、21外显子L858R点突变型细胞,并用空白质粒获得空白对照细胞,稳筛后得到三种细胞（EGFR-19del细胞、EGFR-21mut细胞和CON细胞）。三种细胞分别进行划痕实验、MTT实验、Western Blot实验和Transwell实验,将三种细胞分别裸鼠皮下注射成瘤和尾静脉注射造肺转移模型,反映三种细胞之间迁移、增殖、侵袭及转移能力的差别,同时利用通路阻断剂和分子拮抗剂探索引起上述差别的相关分子通路。研究结果:划痕实验显示EGFR-21mut细胞迁移速率快于EGFR-19del细胞,MTT实验和裸鼠皮下成瘤实验显示EGFR-21mut细胞增殖活力强于EGFR-19del细胞,Western Blot实验、Transwell实验和肺转移模型实验显示EGFR-21mut细胞的侵袭及转移能力强于EGFR-19del细胞。使用U0126阻断MEK-ERK通路,可下调CXCR4的表达,同时可降低EGFR-21mut细胞的上述能力。研究结论:L858R突变细胞无论是迁移速率、增殖活力还是侵袭及转移能力均强于19del突变细胞,可能与L858R突变通过EGFR下游的MEK-ERK通路上调CXCR4的表达有关。CXCR4可能成为L858R突变肺腺癌联合治疗的潜在治疗靶点。