【摘 要】
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研究目的:探讨槐定碱对肝癌SMMC-7721细胞体外增殖与凋亡作用的影响,为肝癌的药物治疗提供新的依据。研究方法:(1)细胞培养:人肝癌SMMC-7721细胞用含10%胎牛血清的DMEM,在37℃
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研究目的:探讨槐定碱对肝癌SMMC-7721细胞体外增殖与凋亡作用的影响,为肝癌的药物治疗提供新的依据。研究方法:(1)细胞培养:人肝癌SMMC-7721细胞用含10%胎牛血清的DMEM,在37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养2-3d更换培养基,取对数生长期细胞进行后续实验。(2)细胞处理及实验分组:取上述细胞,经胰酶消化后离心,弃上清,用培养液重悬后,调整细胞密度约为1*104个/mL接种于96孔板中,100μL每孔,于37℃、5%CO2的培养箱中培养过夜使细胞充分贴壁,将细胞随机分为6组,对照组细胞不做处理,处理组按加入的槐定碱浓度不同分为5组,槐定碱浓度分别为0.5 mmol/L,1 mmol/L,2 mmol/L,4mmol/L,8mmol/L,每组设6个平行孔。继续培养48h后,采用倒置显微镜观察细胞形态变化。(3)运用CCK8实验检测不同浓度槐定碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响。(4)运用流式细胞法检测不同浓度槐定碱对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响。(5)运用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平差异。研究结果:(1)倒置显微镜镜下观察发现,当槐定碱浓度增高时,SMMC-7721细胞明显分布稀疏并且一部分细胞出现皱缩及凋亡。(2)槐定碱作用肝癌细胞SMMC-7721的IC50为7.167(95%CI:5.167-9.943)。(3)CCK8法结果显示,槐定碱药物处理组(8 mmol/L)较对照组细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)。(4)流式细胞法结果显示,当槐定碱作用SMMC-7721细胞的浓度升高时,总凋亡率也随之增加。(P<0.05)。(5)免疫印迹法结果显示,随着槐定碱浓度的升高,SMMC-7721细胞内Bax蛋白表达量明显高于其余5组(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量明显低于其余5组(P<0.05)。结论:槐定碱可能通过上调肝癌SMMC-7721细胞的Bax表达水平并且抑制Bcl-2表达水平,从而达到抑制细胞增殖和促进凋亡的作用。
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