髓样分化因子-2相关的脂质识别（myeloid differentiation factor 2（MD-2）—related lipid-recognition,ML）结构域存在于多种蛋白质中,包括MD-2、MD-1、Niemann-Pick病C2型（NPC2）、GM2激活蛋白（GM2 activator protein,GM2A）和多种功能未知的蛋白。ML蛋白主要参与调节细胞内的脂质代谢、LPS通路介导的免疫反应,以及其他与脂质识别相关的功能。脊椎动物ML蛋白的研究相对较为深入,其中MD-2和NPC2两类蛋白功能相对较为清晰,MD-2被鉴定为LPS传导中TLR4的辅助受体。NPC2基因的突变会导致胆固醇从溶酶体排出的障碍,这是一种神经退行性溶酶体脂质贮积症。而在无脊椎动物中,ML蛋白的研究主要聚焦于宿主与病毒之间的相互作用以及抗菌反应,但是具体的机制并不清楚。本论文以中华绒螯蟹为研究对象,利用分子生物学的相关方法和手段探究了ML蛋白在该蟹中的功能及其参与免疫的机制。基于中华绒螯蟹基因组和转录组数据,鉴定获得三个ML基因（Es ML1-3）,均包括一个信号肽和一个典型的MD-2相关脂质识别（ML）域,其中ML结构域几乎覆盖了Es ML1（aa 33～156）、Es ML2（aa 31～153）和EsML3（aa23～144）蛋白的整个编码区。尽管三种ML基因都包含ML结构域,但它们在氨基酸水平上的序列相似性很低。上述三个基因均在中华绒螯蟹各组织中广泛表达,且在细菌感染后其表达量均有不同程度的上调,但EsML3的表达极显著上调,达到了35倍左右。为此,进一步对EsML3进行了探究。利用表达的EsML3重组蛋白（r EsML3）进行细菌结合实验发现,r EsML3对所检测的8种细菌均表现出结合活性,但对革兰氏阴性菌的结合能力更强。鉴于EsML3对被测微生物表现出很强的结合活性,我们推测细胞表面的某些成分被EsML3识别。ELISA结果显示r EsML3以剂量依赖性方式与肽聚糖、脂多糖相互结合,表明EsML3对微生物细胞壁成分具有广泛的结合活性。同时,细菌凝集实验表明EsML3有效促进细菌凝集。尽管r EsML3没有显示出直接的抑菌或杀菌活性,在进一步的细菌清除实验中,用r EsML3预培养细菌显著促进体内细菌清除。除了凝集,吞噬作用是清除入侵病原体的另一个关键机制,r EsML3也表现出显著促进体内血细胞的吞噬。此外,EsML3敲低下调了副溶血弧菌感染后几种抗菌肽（Es ALF3、Es Crus1、Es Crus2和Es DWD）的表达水平,表明EsML3参与调控中华绒螯蟹中一些抗菌肽的表达。综上所述,中华绒螯蟹EsML3具有对多种PAMPs和微生物的识别活性,并通过识别PAMP、凝集侵入性微生物和促进血细胞中的细菌清除和吞噬作用来介导细胞免疫反应,同时参与了AMPs的表达调控。该研究丰富了无脊椎动物ML家族的功能多样性,为深入探究ML的免疫学功能提供了理论参考。